味覚受容体の生化学的解析および機能抗体作製に向けた基盤技術の開発

• 研究課題/領域番号: 26750365
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 生物分子化学
• 研究機関: 愛媛大学
• 研究代表者: 竹田 浩之 愛媛大学, プロテオサイエンスセンター, 准教授 (40609393)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 3,770千円 (直接経費: 2,900千円、間接経費: 870千円); 2015年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円); 2014年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
• キーワード: モノクローナル抗体 / GPCR / 抗原 / 無細胞タンパク質合成 / 味覚受容体 / リポソーム / 膜タンパク質 / 相互作用 / コムギ無細胞系 / 脂質 / コムギ無細胞合成 / プロテオリポソーム / 抗体

研究成果の概要

甘味と旨味を感知するT1RファミリーGPCRは細胞系を用いた大量発現が困難で、抗体などの研究ツールも不足している。本研究では無細胞膜タンパク質合成系を用い、T1R1とT1R3を大量合成し、それぞれの受容体に特異的に結合するモノクローナル抗体を作成した。また、副産物としてアゾレクチン脂質に対するモノクローナル抗体も取得した。この抗体はアゾレクチン脂質を認識するが、EggPCには結合しない。この抗体を用いてリポソーム間の相互作用を検出する新しいアッセイ系を開発した。本研究で開発した抗体及び相互解析手法はT1Rを含む膜タンパク質の機能解析への貢献が期待される。

研究成果

• [雑誌論文] 無細胞技術を基盤とした抗GPCR モノクローナル抗体作製技術の開発 (2016)
  • 著者名/発表者名: 竹田浩之、澤崎達也
  • 雑誌名: 月刊バイオインダストリー 巻: 32 ページ: 56-62
• [雑誌論文] Production of monoclonal antibodies against GPCR using cell-free synthesized GPCR antigen and biotinylated liposome-based interaction assay (2015)
  • 著者名/発表者名: Takeda H, Ogasawara T, Ozawa T, Muraguchi A, Jih PJ, Morishita R, Uchigashima M, Watanabe M, Fujimoto T, Iwasaki T, Endo Y, Sawasaki T
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 5 号: 1 ページ: 11333-11333
  • DOI: 10.1038/srep11333
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Na,K-ATPaseα3 is a death target of alzheimer patient amyloid-β assembly. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ohnishi T, ..., Matsui K, ..., Hoshi M （計35名, 記載欄不足）
  • 雑誌名: Proc Natl Acad Sci U S A 巻: 112 号: 32 ページ: 4465-4474
  • DOI: 10.1073/pnas.1421182112
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Claudin-1 Binder Enhances Epidermal Permeability in a Human Keratinocyte Model (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakajima M, Nagase S, Iida M, Takeda S, Yamashita M, Watari A, Shirasago Y, Fukasawa M, Takeda H, Sawasaki T, Yagi K, Kondoh M
  • 雑誌名: J Pharmacol Exp Ther 巻: 354 号: 3 ページ: 440-447
  • DOI: 10.1124/jpet.115.225391
  • 査読あり
• [雑誌論文] リポソーム添加型コムギ無細胞合成系による膜タンパク質合成とその利用 (2015)
  • 著者名/発表者名: 竹田浩之、野澤彰、澤崎達也
  • 雑誌名: ファルマシア 巻: 51 ページ: 770-774
  • NAID: 130007448253
• [学会発表] Production of monoclonal antibodies against GPCR using cell-free synthesized GPCR antigen and biotinylated liposome-based interaction assay. (2015)
  • 著者名/発表者名: Takeda H, Ogasawara T, Ozawa T, Muraguchi A, Jih PJ, Morishita R, Uchigashima M, Watanabe M, Fujimoto T, Iwasaki T, Endo Y, Sawasaki T.
  • 学会等名: GPCR work shop
  • 発表場所: Kona, Big island Hawaii, Hi, USA
  • 年月日: 2015-12-01
  • 国際学会
• [学会発表] Production of monoclonal antibodies against GPCR using cell-free synthesized GPCR antigen and biotinylated liposome-based interaction assay (2015)
  • 著者名/発表者名: 2) Takeda H, Ogasawara T, Ozawa T, Muraguchi A, Jih PJ, Morishita R, Uchigashima M, Watanabe M, Fujimoto T, Iwasaki T, Endo Y, Sawasaki T
  • 学会等名: Protein Island Matsuyama international symposium
  • 発表場所: 松山市男女共同参画推進センター（愛媛県・松山市）
  • 年月日: 2015-09-25
  • 国際学会
• [学会発表] 栄谷 紘一、竹田 浩之、小澤 龍彦、村口 篤、三坂 巧、森下 了、澤崎 達也 (2015)
  • 著者名/発表者名: コムギ無細胞合成系を基盤とした旨味/甘味受容体タンパク質の合成とモノクローナル抗体の作製
  • 学会等名: 日本農芸化学会
  • 発表場所: 岡山大学
  • 年月日: 2015-03-26 – 2015-03-29
• [学会発表] Cell-free Synthesized G-protein-coupled Receptor Proteoliposome is Efficient for Biochemical Analysis and Monoclonal Antibody Development (2014)
  • 著者名/発表者名: Hiroyuki Takeda, Tomio Ogasawara, Tatsuhiko Ozawa, Atsushi Muraguchi, Yaeta Endo, Tatsuya Sawasaki
  • 学会等名: Discovery on Target 2014
  • 発表場所: 米国ボストン
  • 年月日: 2014-10-08 – 2014-10-10
• [学会発表] コムギ無細胞タンパク質合成系を基盤とした 甘味受容体機能構造解析のための技術開発 (2014)
  • 著者名/発表者名: 栄谷紘一・竹田浩之・小澤龍彦・村口篤・澤崎達也
  • 学会等名: GPCR研究会
  • 発表場所: 日本科学未来館
  • 年月日: 2014-05-09 – 2014-05-10
• [備考] プロテオサイエンスセンター トピックス
  • URL: http://www.pros.ehime-u.ac.jp/topics/detail.php?serial=76
• [備考] 愛媛大学プレスリリース
  • URL: http://www.pros.ehime-u.ac.jp/upfile/1434934243_01.pdf