リン酸化シグナリング解析手法の確立とシグナル研究への展開

• 研究課題/領域番号: 26750372
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: ケミカルバイオロジー
• 研究機関: 香川大学
• 研究代表者: 杉山 康憲 香川大学, 農学部, 助教 (10632599)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2016年度)
• 配分額: 3,770千円 (直接経費: 2,900千円、間接経費: 870千円); 2016年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円); 2015年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2014年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
• キーワード: リン酸化シグナリング / プロテインキナーゼ / マルチPK抗体 / Phos-tag / プロテオミクス / 二次元電気泳動 / リン酸化プロテオーム / 細胞分化 / Phos-tag SDS-PAGE / 抗がん剤 / リン酸化シグナル / タンパク質リン酸化

研究成果の概要

細胞内プロテインキナーゼの発現量とリン酸化状態を解析するため、マルチPK抗体とPhos-tagを組み合わせた新手法を開発した。ヒト前骨髄性白血病細胞HL-60を用いた解析により、抗がん剤耐性に関わるキナーゼの同定や細胞の分化に関わるキナーゼを検出した。これらの研究から、開発した新手法が細胞内プロテインキナーゼの解析を通して様々な生命現象や疾病の解明に有用であることが明らかとなった。

研究成果

• [雑誌論文] Subcellular distribution of cyclin-dependent kinase-like 5 (CDKL5) is regulated through phosphorylation by dual specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase 1A (DYRK1A) (2017)
  • 著者名/発表者名: Ami Oi, Syouichi Katayama, Naoya Hatano, Yasunori Sugiyama, Isamu Kameshita, Noriyuki Sueyoshi
  • 雑誌名: Biochemical and Biophysical Research Communications 巻: 482 号: 2 ページ: 239-245
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2016.11.048
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] マルチPK抗体を利用したプロテインキナーゼ研究 (2017)
  • 著者名/発表者名: 杉山 康憲、亀下 勇
  • 雑誌名: 電気泳動 巻: 61
  • NAID: 130005863670
  • 査読あり
• [雑誌論文] Suppression of miR-7 biogenesis by NF90-NF45 controls cell proliferation in hepatocellular carcinoma. (2016)
  • 著者名/発表者名: Higuchi T, Todaka H, Sugiyama Y, Ono M, Tamaki N, Hatano E, Takezaki Y, Hanazaki K, Miwa T, Chin See LS, Morisawa K, Tsuda M, Taniguchi T, Sakamoto S
  • 雑誌名: J Biol Chem 巻: 291 号: 40 ページ: 21074-21084
  • DOI: 10.1074/jbc.m116.748210
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Phosphorylated TandeMBP: A unique protein substrate for protein phosphatase assay (2016)
  • 著者名/発表者名: Yasunori Sugiyama, Sho Yamashita, Yuuki Uezato, Yukako Senga, Syouichi Katayama, Naoki Goshima, Yasushi Shigeri, Noriyuki Sueyoshi, Isamu Kameshita
  • 雑誌名: Analytical Biochemistry 巻: 513 ページ: 47-53
  • DOI: 10.1016/j.ab.2016.08.020
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Expression analyses of splice variants of zebrafish cyclin-dependent kinase-like 5 and its substrate, amphiphysin 1 (2016)
  • 著者名/発表者名: Syouichi Katayama, Yukako Senga, Ami Oi, Yosuke Miki, Yasunori Sugiyama, Noriyuki Sueyoshi, Isamu Kameshita
  • 雑誌名: Gene 巻: 583 号: 1 ページ: 15-23
  • DOI: 10.1016/j.gene.2016.02.036
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Overexpression of NF90-NF45 represses myogenic microRNA biogenesis, developing skeletal muscle atrophy and centronuclear muscle fibers (2015)
  • 著者名/発表者名: Hiroshi Todaka, Takuma Higuchi, Ken-ichi Yagyu, Yasunori Sugiyama, Fumika Yamaguchi, Keiko Morisawa, Masafumi Ono, Atsuki Fukushima, Masayuki Tsuda, Taketoshi Taniguchi, Shuji Sakamoto
  • 雑誌名: Molecular and Cellular Biology 巻: 35 号: 13 ページ: 2295-2308
  • DOI: 10.1128/mcb.01297-14
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Cell-based inhibitor screening identifies multiple protein kinases important for circadian clock oscillations (2015)
  • 著者名/発表者名: Naohiro Kon, Yasunori Sugiyama, Hikari Yoshitane, Isamu Kameshita, Yoshitaka Fukada
  • 雑誌名: Communicative & Integrative Biology 巻: 8 号: 4 ページ: 1-4
  • DOI: 10.4161/19420889.2014.982405
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] マルチPK抗体とPhos-tagを利用した細胞内リン酸化動態の新規解析法 (2015)
  • 著者名/発表者名: 杉山 康憲、亀下 勇、坂本 修士
  • 雑誌名: 生物物理化学 巻: 59 ページ: 82-84
  • NAID: 130005103931
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression and phosphorylation state analysis of intracellular protein kinases using Multi- PK antibody and Phos- tag SDS- PAGE. (2015)
  • 著者名/発表者名: Sugiyama, Y., Katayama, S., Kameshita, I., Morisawa, K., Higuchi, T., Todaka, H., Eiji Kinoshita, Kinoshita- Kikuta, E., Koike, T., Taniguchi, T., Sakamoto, S.
  • 雑誌名: MethodsX 巻: 2 ページ: 469-474
  • DOI: 10.1016/j.mex.2015.11.007
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] CaMKII is essential for the cellular clock and coupling between morning and evening behavioral rhythms. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kon N, Yoshikawa T, Honma S, Yamagata Y, Yoshitane H, Shimizu K, Sugiyama Y, Hara C, Kameshita I, Honma K, Fukada Y.
  • 雑誌名: Genes Dev 巻: 28 号: 10 ページ: 1101-1110
  • DOI: 10.1101/gad.237511.114
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] 液相等電点泳動を用いた二次元電位泳動法の活用 (2014)
  • 著者名/発表者名: 杉山 康憲、片山 将一、馬場 裕美、末吉 紀行、亀下 勇
  • 雑誌名: 生物物理化学 巻: 58 ページ: 56-58
• [学会発表] がん部におけるmiRNAを介したNF90-NF45の発現制御 (2016)
  • 著者名/発表者名: 樋口 琢磨、森澤 啓子、Lai Sylvia Chin See、三輪 武司、池 恩燮、戸高 寛、杉山 康憲、津田 雅之、坂本修士
  • 学会等名: 第39回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2016-11-30
• [学会発表] 二本鎖RNA結合タンパク質NF90-NF45の発現増加は生体における造腫瘍能を上昇させる (2016)
  • 著者名/発表者名: 樋口 琢磨、三輪 武司、延本 篤也、森澤 啓子、Lai Sylvia Chin See、池 恩燮、戸高 寛、杉山 康憲、津田 雅之、坂本修士
  • 学会等名: 第39回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2016-11-30
• [学会発表] 慢性的な高グルコースによるインスリン分泌細胞INS-1内のコレステロールの増加はインスリン発現の障害を誘導する (2016)
  • 著者名/発表者名: 藤井 修作、戸髙 寛、樋口 琢磨、坂本 修士、村尾 孝児、杉山 康憲
  • 学会等名: 第39回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2016-11-30
• [学会発表] 膵島b細胞において内在性RNA結合タンパク質NF45が有する新たな細胞制御作用 (2016)
  • 著者名/発表者名: Sylvia Lai, 樋口 琢磨、津田 雅之、森澤 啓子、杉山 康憲、三輪 武司、戸髙 寛、坂本 修士
  • 学会等名: 第39回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2016-11-30
• [学会発表] Cultivation of some edible mushrooms on the sawdust medium supplemented with rare sugars (2016)
  • 著者名/発表者名: Issei Yoshino, Makoto kawate, Mayu Onodera, Rina Takaoka, Yasunori Sugiyama, Akira Watanabe, Akihide Yoshihara, Ken Izumori, Yasuhiko Asada
  • 学会等名: The 6th Symposium of International Society of Rare Sugars
  • 発表場所: Kagawa
  • 年月日: 2016-11-24
  • 国際学会
• [学会発表] マルチPK抗体：プロテインキナーゼを幅広く認識できる解析ツール (2016)
  • 著者名/発表者名: 杉山 康憲、亀下 勇
  • 学会等名: 第67回日本電気泳動学会総会
  • 発表場所: 北海道
  • 年月日: 2016-08-26
  • 招待講演
• [学会発表] Elucidation of the role of the doublestranded RNA binding protein NF90-NF45 complex in muscular regeneration (2016)
  • 著者名/発表者名: Hiroshi Todaka, Takuma Higuchi, Keiko Morisawa, Takeshi Miwa, Lai Sylvia Chin See, Masayuki Tsuda, Yasunori Sugiyama, Mikihiko Arikawa, Takayuki Sato, Shuji Sakamoto
  • 学会等名: RNA2016
  • 発表場所: Kyoto
  • 年月日: 2016-06-28
  • 国際学会
• [学会発表] 脱リン酸化解析用タンパク質基質（リン酸化TandeMBP）の開発 (2016)
  • 著者名/発表者名: 上里 裕樹、山下 翔、千賀 由佳子、片山 将一、五島 直樹、茂里 康、末吉 紀行、亀下 勇、杉山 康憲
  • 学会等名: 第57回日本生化学会中国・四国支部例会
  • 発表場所: 高知
  • 年月日: 2016-05-27
• [学会発表] 2型糖尿病の糖毒性に関わるリン酸化シグナル因子の同定と解析 (2016)
  • 著者名/発表者名: 井戸 彩詠、樋口 琢磨、戸髙 寛、坂本 修士、村尾 孝児、杉山 康憲
  • 学会等名: 第57回日本生化学会中国・四国支部例会
  • 発表場所: 高知
  • 年月日: 2016-05-27
• [学会発表] 膵臓ランゲルハンス島におけるRNA結合タンパク質が有する新たな細胞制御作用 (2016)
  • 著者名/発表者名: Lai Sylvia Chin See、樋口 琢磨、杉山 康憲、森澤 啓子、三輪 武司、戸高 寛、津田 雅之、坂本 修士
  • 学会等名: 第57回日本生化学会中国・四国支部例会
  • 発表場所: 高知
  • 年月日: 2016-05-27
• [学会発表] 造腫瘍能における二本鎖RNA結合蛋白質複合体NF90-NF45の影響 (2016)
  • 著者名/発表者名: 樋口 琢磨、戸高 寛、三輪 武司、森澤 啓子、Sylvia Lai Chin See、小野 正文、杉山 康憲、津田 雅之、坂本 修士
  • 学会等名: 第57回日本生化学会中国・四国支部例会
  • 発表場所: 高知
  • 年月日: 2016-05-27
• [学会発表] 膵臓における二本鎖RNA結合タンパク質NF90及びNF45の機能解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: Lai Sylvia Chin See, 樋口 琢磨、杉山 康憲、森澤 啓子、戸髙 寛、三輪 武司、津田 雅之、坂本 修士
  • 学会等名: BMB2015
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2015-12-01
• [学会発表] 担子菌Coprinopsis cinereaの成長菌糸に存在するCaMキナーゼ(CoPK02)の性質 (2015)
  • 著者名/発表者名: 山下 雅史、片山 将一、千賀 由佳子、杉山 康憲、末吉 紀行、亀下 勇
  • 学会等名: BMB2015
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2015-12-01
• [学会発表] 抗がん剤を処理したヒト白血病細胞HL-60の細胞内キナーゼの発現およびリン酸化動態の解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 杉山 康憲、片山 将一、亀下 勇、森澤 啓子、樋口 琢磨、戸髙 寛、木下 英司、木下 恵美子、小池 透、坂本 修士
  • 学会等名: BMB2015
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2015-12-01
• [学会発表] Dual specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase 1A（DYRK１A）によるCyclin-dependent kinase-like 5（CDKL5）のリン酸化とその意義 (2015)
  • 著者名/発表者名: 大井 愛海、片山 将一、三木 洋祐、波多野 直哉、杉山 康憲、末吉 紀行、亀下 勇
  • 学会等名: BMB2015
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2015-12-01
• [学会発表] Ca2+/CaM-dependent protein kinase I (CaMKI) によるDistal-less homeobox 1 (Dlx1) のリン酸化とオステオカルシンの転写制御 (2015)
  • 著者名/発表者名: 秋月 一駿、千賀 由佳子、杉山 康憲、亀下 勇、末吉 紀行
  • 学会等名: BMB2015
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2015-12-01
• [学会発表] マルチPK抗体とPhos-tagを利用した細胞内リン酸化動態の新規解析法 (2015)
  • 著者名/発表者名: 杉山 康憲、亀下 勇、坂本 修士
  • 学会等名: 第６６回日本電気泳動学会総会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2015-09-04
  • 招待講演
• [学会発表] Multi-PTK Antibody: A Powerful Tool to Detect a Wide Variety of Protein Tyrosine Kinases (PTKs) (2015)
  • 著者名/発表者名: Isamu Kameshita, Noriyuki Sueyoshi, Yasunori Sugiyama
  • 学会等名: The 29th Annual Symposium of The Protein Society
  • 発表場所: スペイン、バルセロナ
  • 年月日: 2015-07-22
  • 国際学会
• [学会発表] Rett症候群の発症に関わるCyclin-dependent kinase-like 5 (CDKL5)のアミノ酸変異と基質リン酸化活性 (2015)
  • 著者名/発表者名: 大井 愛海、片山 将一、杉山 康憲、末吉 紀行、亀下 勇
  • 学会等名: 第56回日本生化学会中国・四国支部例会
  • 発表場所: 島根
  • 年月日: 2015-05-29
• [学会発表] カルモジュリン依存性プロテインキナーゼIアイソフォーム(CaMKIgとCaMKIg)の自己リン酸化に着目した比較解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 秋月 一駿、千賀 由佳子、杉山 康憲、亀下 勇、末吉 紀行
  • 学会等名: 第56回日本生化学会中国・四国支部例会
  • 発表場所: 島根
  • 年月日: 2015-05-29
• [学会発表] マウス肝臓の概日時計を制御する転写因子複合体のプロテオミクス解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 広瀬 健太郎、杉山 康憲、吉種 光、秦（小塚） 裕子、尾山 大明、深田 吉孝
  • 学会等名: 第37回分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2014-11-27
• [学会発表] Ca2+/CaM-dependent protein kinase I (CaMKI)によるDistal-less homeobox 1 (Dlx1)を介した骨形成メカニズム (2014)
  • 著者名/発表者名: 千賀 由佳子、杉山 康憲、亀下 勇、末吉 紀行
  • 学会等名: 第37回分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2014-11-25
• [学会発表] ゼブラフィッシュに存在する2種類のCyclin-dependent kinase-like 5 (CDKL5)のスプライスバリアントの比較解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 片山 将一、千賀 由佳子、大井 愛海、三木 洋祐、杉山 康憲、末吉 紀行、亀下 勇
  • 学会等名: 第37回分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2014-11-25
• [学会発表] 液相等電点泳動を用いた二次元電気泳動法の活用 (2014)
  • 著者名/発表者名: 杉山 康憲、片山 将一、馬場 裕美、末吉 紀行、亀下 勇
  • 学会等名: 第６５回日本電気泳動学会総会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2014-10-25
  • 招待講演
• [学会発表] Ca2+/CaM-dependent protein kinase I (CaMKI) regulates Distal-less homeobox 1 (Dlx1) during osteogenic signaling (2014)
  • 著者名/発表者名: Yukako Senga, Yasunori Sugiyama, Isamu Kameshita, Noriyuki Sueyoshi
  • 学会等名: The 15th IUBMB-24th FAOBMB-TSBMB Conference
  • 発表場所: 台湾
  • 年月日: 2014-10-23
• [学会発表] Roles of CaMKII in circadian clock system (2014)
  • 著者名/発表者名: Naohiro Kon, Tomoko Yoshikawa, Sato Honma, Yoko Yamagata, Hikari Yoshitane, Kimiko Shimizu, Yasunori Sugiyama, Chihiro Hara, Isamu Kameshita, Kenichi Honma, Yoshitaka Fukada
  • 学会等名: 第８７回日本生化学会大会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2014-10-18
  • 招待講演
• [学会発表] マルチPK抗体とPhos-tagを利用した細胞内リン酸化シグナリング解析法 (2014)
  • 著者名/発表者名: 杉山 康憲、森澤 啓子、樋口 琢磨、戸高 寛、山口 史佳、安東 徳子、坂本 修士
  • 学会等名: 第８７回日本生化学会大会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2014-10-17
• [学会発表] 二本鎖RNA結合タンパク質が関与する肝細胞癌の新たな遊走能制御 (2014)
  • 著者名/発表者名: 樋口 琢磨、安東 徳子、三輪 武司、戸高 寛、森澤 啓子、Lai Chin See Sylvia, 杉山 康憲、津田 雅之、坂本 修士
  • 学会等名: 第８７回日本生化学会大会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2014-10-17
• [図書] 実験医学、Opinion (2015)
  • 著者名/発表者名: 豊田 優、馬谷 千恵、杉山 康憲
  • 総ページ数: 152
  • 出版者: 羊土社
• [図書] これだけ！ 生化学 (2014)
  • 著者名/発表者名: 有澤 琴子、馬谷 千恵、大上 雅史、小野田 淳人、香川 璃奈、杉山 康憲、高橋 裕佳、瀧慎太郎、道喜 慎太郎、豊田 優、藤原 慶
  • 総ページ数: 291
  • 出版者: 秀和システム