FRETイメージングによる細胞内局在性GPCR活性化の解明

• 研究課題/領域番号: 26860170
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 薬理学一般
• 研究機関: 旭川医科大学
• 研究代表者: 宇和田 淳介 旭川医科大学, 医学部, 助教 (70580314)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円); 2015年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円); 2014年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
• キーワード: ムスカリン受容体 / FRET / GPCR / 薬理学

研究成果の概要

本研究では、細胞内に局在するムスカリンM1受容体に着目し、その活性制御をリアルタイム可視化技術により解析することを目的としている。これまでに解析に必要なM1受容体のFRETコンストラクトを12種類作製しており、神経系細胞株に導入して、活性化に伴う変化の解析を進めている。また、M1受容体と、共役するGタンパク質との相互作用についても解析を進め、両者が細胞表面だけでなく、細胞内でも共役している可能性を示す結果を得た。人為的変異で細胞内に局在化させたM1受容体ではGタンパク質との共局在性が著しく低下したことから、両者の関係性はM1受容体の局在様式に依存することが示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Activation of muscarinic cholinoceptor ameliorates tumor necrosis factor-a-induced barrier dysfunction in intestinal epithelial cells. (2015)
  • 著者名/発表者名: Khan MR, Uwada J, Yazawa T, Islam MT, Krug SM, Fromm M, Karaki S, Suzuki Y, Kuwahara A, Yoshiki H, Sada K, Muramatsu I, Anisuzzaman AS and Taniguchi T.
  • 雑誌名: FEBS Lett. 巻: 589 号: 23 ページ: 3640-3647
  • DOI: 10.1016/j.febslet.2015.10.029
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Regulation of Steroidogenesis, Development, and Cell Differentiation by Steroidogenic Factor-1 and Liver Receptor Homolog-1. (2015)
  • 著者名/発表者名: Yazawa T, 他６名
  • 雑誌名: Zoological Science 巻: 32 号: 4 ページ: 323-330
  • DOI: 10.2108/zs140237
  • NAID: 210000170450
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Intracellular localization of M1 muscarinic acetylcholine receptor through clathrin-dependent constitutive internalization via a C-terminal tryptophan-based motif. (2014)
  • 著者名/発表者名: Uwada J, Yoshiki H, Masuoka T, Nishio M, Muramatsu I.
  • 雑誌名: Journal of Cell Science 巻: １２７ ページ: 3131-3140
  • DOI: 10.1242/jcs.148478
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [学会発表] ムスカリンM1受容体のクラスリン依存的な構成的細胞内移行 (2015)
  • 著者名/発表者名: 宇和田 淳介 他
  • 学会等名: 第38回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド（兵庫県）
  • 年月日: 2015-12-01