膵癌幹細胞に関わる薬剤耐性関連microRNAの同定とその臨床応用

• 研究課題/領域番号: 26861071
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 消化器外科学
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 長谷川 慎一郎 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 (60621026)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2015-03-31
• 研究課題ステータス: 中途終了 (2014年度)
• 配分額: 3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円); 2015年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円); 2014年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
• キーワード: miR-1246 / 癌幹細胞性 / 薬剤耐性 / 新規治療標的

研究実績の概要

1. 膵癌細胞株を用いた薬剤耐性株の樹立とsphere形成プロトコールの確立。膵癌細胞株Panc1およびMiaPaCa2を用いて膵癌標準治療薬であるジェムシタビン（GEM）に持続曝露し、耐性株を樹立した。樹立した耐性株について、再度MTTアッセイを行い、耐性の獲得を確認した。次にsphere形成を行った。Panc1を用いて無血清培地(EGF,FGFを添加)・非接着培地を用い、1週間でsphereを形成した。MiaPaCa2ではやや形状がいびつであった。
2. 膵癌幹細胞関連miRNAプロファイリングの作成と候補miRNAの同定。親株と耐性株並びに親株とSphereにおいてマイクロアレイ解析を施行し、共通して特に顕著な発現上昇を認めたmiR-1246を候補として選出した。
3. 候補miRNAの細胞株への遺伝子導入による形質変化の確認。Pre/Anti-miR-1246をPanc1およびMiaPaCa2に形質導入し、耐性の上昇および減弱を確認した。さらにPre-miR-1246の導入によりSphere形成能の有意な上昇も確認した。
4. 候補miRNA導入細胞株を用いた免疫不全マウス移植による検証。まずレンチウイルスベクターを用いてPanc1のmiR-1246持続強制発現株を樹立し、その発現が約50倍に上昇していることを確認した。免疫不全マウスNOD/SCIDにそれぞれ4ヶ所、接種細胞個数を変えて皮下移植し造腫瘍能およびGEMの腹腔内投与に対する治療抵抗性の変化を確認した。miR-1246持続強制発現株では有意に造腫瘍能が亢進し、GEM腹腔内投与に対して治療抵抗性の増強を認めた。
以上よりmiR-1246は膵癌細胞株において癌幹細胞性に関わるmiRNAであることが示された。今後miR-1246の臨床検体での発現を調べていくことにより新たな治療標的となる可能性もしくは新たなバイオマーカーとなり得る可能性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] MicroRNA-1246 expression associated with CCNG2-mediated chemoresistance and stemness in pancreatic cancer (2014)
  • 著者名/発表者名: Shinichiro Hasegawa, Hidetoshi Eguchi, Hiroaki Nagano, Masamitsu Konno, Yoshito Tomimaru, Hiroshi Wada, Naoki Hama, Koichi Kawamoto, Shogo Kobayashi, Naohiro Nishida, Jun Koseki, Takenori Nishimura, Noriko Gotoh, Shouichi Ohno, Norikazu Yabuta, Hiroshi Nojima, Masaki Mori, Yuichiro Doki, and Hideshi Ishii
  • 雑誌名: British Journal of Cancer 巻: 111（8） ページ: 1572-1580
  • 査読あり
• [学会発表] Identification of the crucial microRNA for maintaining the stemness in pancreatic cancer (2014)
  • 著者名/発表者名: 長谷川 慎一郎
  • 学会等名: AACR(American Association for Cancer Research)
  • 発表場所: サンディエゴ、USA
  • 年月日: 2014-04-08
• [学会発表] Identification of the crucial microRNA for maintaining the stemness in pancreatic cancer (2014)
  • 著者名/発表者名: 長谷川 慎一郎
  • 学会等名: 第115回日本外科学会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2014-04-03