| 研究課題/領域番号 |
60440032
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| 研究種目 |
一般研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
医化学一般
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| 研究機関 | 自治医科大学 |
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研究代表者 |
香川 靖雄 自治医科大学, 医学部, 教授 (30048962)
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| 研究分担者 |
浜本 敏郎 自治医科大学, 医学部, 講師 (30189625)
平田 肇 自治医科大学, 医学部, 講師 (40049052)
曽根 〓史 (曽根 のぶ史) 自治医科大学, 医学部, 助教授 (20049034)
太田 成男 自治医科大学, 医学部, 講師 (00125832)
石塚 盛雄 中央大学, 工学部, 講師 (50168241)
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| 研究期間 (年度) |
1985 – 1988
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| 研究課題ステータス |
完了 (1988年度)
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| 配分額 *注記 |
15,200千円 (直接経費: 15,200千円)
1988年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
1987年度: 2,800千円 (直接経費: 2,800千円)
1986年度: 3,300千円 (直接経費: 3,300千円)
1985年度: 7,800千円 (直接経費: 7,800千円)
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| キーワード | H^+ーATPアーゼ / ATP合成酵素 / 遺伝子 / クローニング / ヒト / 好熱菌 / 転写調節 / エンハンサー / ミトコンドリア / 培養細胞 / 遺伝子発現 / ミトコンドリアミオパチー / H^+-ATPアーゼ / 遺伝子操作 / 人工二重膜 / 大量発現部位特異的変異 / 遺伝子の構造 / 【H^+】-ATPアーゼ / 大量発現 / 部位特異的変異 / ATP synthase / human gene / thermophilic ATP ase / proton translocation / signal peptide |
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| 研究概要 |
ATP合成の分子機構を探るには、安定で様々の処理に耐えうる好熱菌ATPアーゼを用い、遺伝子の発現制御という観点からは、倍養細胞株が豊富で、遺伝病の解析にも応用できるヒトを用いて、二つの方向から研究を進め、以下の新しい知見を得た。
ATP合成の分子機構
1.好熱菌PS3より、ATP合成酵素オペロン遺伝子をクローン化し、全塩基配列を決定した。
2.α、β、σサブユニットを遺伝子操作により、大腸菌内で大量に発現させ、精製後、再構成した。従来、αβのみでは活性がないと考えられていたが、おだやかな精製法により精製されたαβのみで活性をあらわした。
3.部位特異的変異によりαサブユニットの役割を明らかにした。
4.大量生産したサブユニットを用いて構造解析を行なった。
ATP合成酵素の発現制御
1.ヒトATP合成酵素βサブユニットを含め、7種のヒトミトコンドリアタンパクCDNAをクローン化した。
2.次いで、ヒトATP合成酵素βサブユニットとピルビン酸脱水素酵素αサブユニットのゲノム遺伝子をクローン化した。
3.ゲノム遺伝子の5'側上流には転写を促進するエンハンサーが存在することを見い出し、その構造は既知のものとは明らかに異り、また、シトクロムC1とこの二つの遺伝子に共通の構造であった。
4.倍養細胞を用いて、酸素分圧を変化させたり、同調倍養することによって、ATP合成酵素の転写速度は変化した。
5.ミトコンドリア病患者より、酸化的リン酸化欠損株を分離した。
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