| 研究概要 |
近年の生化学の進歩に伴なって, 生体反応の解析やバイオテクノロジー等のために核酸構成成分等の生体微量物質の分離, 分析技術が必須のものとなり, 高精度で迅速なシステムの開発が望まれている. 従来電気泳動や, 高速液体クロマトグラフィ(HPLC)が用いられてきたが, 電気泳動は良い分離能を示すが, 試料が少量で操作が繁雑なことから, より簡便で連続操作が可能なHPLCの方が将来有力な分析, 分離手段となることと考えられる. 本研究は, 核酸構成成分を, 塩基配列の違いにより分離するシステムの開発でり, 核酸フラグメントの有効な分離, 分析手段になると考えられる.
本研究では, 核酸塩基間の特異的相互作用を利用したHPLCシステムを開発した. まず, シリカゲルにチミン, ウラシル, シトシン, アデニン, 上ポキサンチン, グアニン等の核酸塩基を化学結合により固定化した樹脂を合成した. また, 核酸塩基を側鎖に含むポリーL-リジンのシリカゲルへの固定化にも成功した. これらのHPLC樹脂を用いて, 核酸塩基を含むオリゴエチレンイミンの分離を行なった結果では, 核酸塩基の相補的相互作用によって分離されていることが明らかとなった. また, ヌクレオシド, ヌクレオチド, オリゴヌレレオチド等の核酸成分もこれらの樹脂により相補的な分離が可能であった. オリゴヌクレオチドの分離においては, 相補的な塩基を含むオリゴヌクレオチドが選択的に分離された.
本研究の結果により, 核酸塩基誘導体を固定化したHPLC用樹脂はその相補的核酸塩基を選択的に認識する事が明らかとなり, オリゴヌクレオチド中の核酸塩基も選択的に読み出すことが明らかとなった. 従って, この樹脂は核酸関連の研究に必要な核酸成分の分離分析に有効であり, 特に, 他の方法では分離が困難な一塩基だけが異なる高重合度オリゴヌクレオチドの分離にも有効である.
|
