| 研究課題/領域番号 |
60870034
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| 研究種目 |
試験研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
小児科学
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
中村 肇 神戸大学, 医学部付属病院, 講師 (40030978)
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| 研究分担者 |
生越 義昌 株式会社アローズ, 取締役社長
OGOSHI Yoshiaki Arrows Co. President
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| 研究期間 (年度) |
1985 – 1986
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| 研究課題ステータス |
完了 (1986年度)
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| 配分額 *注記 |
1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
1986年度: 300千円 (直接経費: 300千円)
1985年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
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| キーワード | スーパーオキサイド / 好中球 / PMA / スーパーオキサイド産生能 / 好中球機能 / 微量測定法 |
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| 研究概要 |
研究者らは微量検体で感度よく活性酸素の定量を可能とすべく、光学系に工夫を加えた専用測定機器の開発を行い、好中球活性酸素産生能測定の臨床的応用を試みてきた。
測定機器は、チトクロームC法を測定系として、光学的検出には近接2波長の分解能を向上さすため多層膜の特殊干渉フィルターを用い、かつ超高感度対数増幅囲路、精密温度制御ブロックの導入により、従来の分光光度計では不可能であったチトクロームCの微量変化の検出を可能とした。
好中球の分離:ヘパリン血を等量のヘモセルに加え静置し、血漿中白血球浮遊液を作成、さらにLymphoprepに重畳後遠沈し、好中球分離液を作成した。
反応系:好中球浮遊液20μl(5〜10×10^4PMNs)を40μMチトクロームC及び2.5mM Glucoseを含むPBS(+)液に加え、37゜C、2分間preincubateし、刺激物質としてPMA、ConA/CytD、FMLPを加え反応を開始する。OD_<550-540>の吸光度変化より好中球10^6個当たり1分間に産生されるO_2^-量を求める。
結果:1)刺激物質至適量の検討:PMA量は分離好中球では0.01〜5μg、血漿好中球では0.1〜5μgの範囲で一定の値を示した。ConAは10〜100μg、CytDは2〜10μg、FMLPは0.1〜1.0μmolesでそれぞれ一定の値を示した。2)血漿好中球と分離好中球の比較:健常成人10検体、新生児10検体を用い比較検討したところ、PMAを刺激物質として用いた場合には両者間でO_2^-産き量は良い相関を示したが、ConA/CytDを刺激物質として用いた場合には、新生児好中球では良い相関が得られたが、成人好中球では血漿好中球を検体とした場合には、分離好中球より低値を示した。以上より新生児好中球O_2^-産生量測定に当っては血漿浮遊液を用いることにより、微量血液で簡便・迅速に測定し得ることが明らかとなった。
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