| 研究課題/領域番号 |
61231023
|
|---|
| 研究種目 |
特定研究
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究機関 | 広島大学 |
|---|
研究代表者 |
仲村 春和 広島大, 医学部, 助教授 (90079690)
|
|---|
| 研究分担者 |
山本 正夫 広島大学, 医学部, 講師 (00109399)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1986
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1986年度)
|
| 配分額 *注記 |
1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
1986年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
|
|---|
| キーワード | 脳の分化 / ニワトリ・ウズラ・キメラ / 網膜一視蓋投射 / 分化の可塑性 / モノクローン抗体 |
|---|
| 研究概要 |
脳はその発生の初期に前脳胞,中脳胞,菱脳胞という基本的な枠組みができ、その後の複雑な構造の基礎になる。本研究ではこの脳胞の分化の可塑性について、ニワトリ・ウズラ・キメラを作製して解析した。
まず、孵卵2日目で、7-10体節期のウズラ前脳胞の背側の一部をニワトリ胚中脳胞の背側に移植した。孵卵15日に移植を受けた脳の左眼(移植と反対側)に【^3H】-プロリンとホースラディッシュペルオキシダーゼ(HRP)を注入し、注入10-15時間後にDAB反応を行って視蓋での視神経の走行を観察した。次にCarnoy液で固定し、連続切片を作製後オートラジオグラフィーを行った。移植片は、その核の形態により、ニワトリ細胞と識別できる。一部の脳は4%ホルムアルデヒドで固定後、30μmの凍結切片を作製して、ニワトリの神経線維と特異的に反応するモノクローン抗体で免疫組織化学的に染色した。
移植された前脳胞は中脳に完全にとり込まれると視蓋様の層構造をとった。この様な前脳胞が中脳に移植されることによって分化した視蓋様組織が視神経の投射を受けるかどうかは大変興味のある問題である。オートラジオグラフ上で銀粒子の分布パターンをグラフに表してみると、移植片領域とホスト領域で同様であった。この分布パターンは正常発生過程で、視神経が視蓋にシナプスを形成して投射するパターンと同様である。またニワトリ視神経線維と特異的に反応するモノクローン抗体で染色しても、移植片が視蓋様構造をとっている例では、移植片領域,ホスト領域で視神経線維は連続していた。以上の結果は、前脳胞から分化した視蓋様組織は真の視蓋であることを示している。一方、視蓋には分化できるような7-10体節期の前脳胞を小脳の発生の場である後脳に移植すると決して小脳には分化しなかった。これらのことは分化の決定が段階的に起こっていくことを示している。現在、電顕により移植片へのシナプスを観察している。
|
