| 研究概要 |
B.gingivalis381(B.g)株染色体DNA Sau3A切断断片のλL47.1ファージベクターによる遺伝子バンクを作成し, B.g菌体から分離した細胞表層抗原に対する抗血清と免疫学的に反応するクローンをスクリーニングした. その中からλMDBGIを選択した. λMDBGIのクローン蛋白質は他のBacteroides細胞表層抗原で免疫して得た抗血清とは反応せず, B.gに対して良く反応した. λMDBGIクローンDNAを^<32>P標識したプローグを用いて, 種のBacteroides染色体DNAとSoutharn gel DNA-DNA hybridizationを行ったところ, B.gの染色体DNAとのみ反応した. 以上の結果から, クローン蛋白質はB.gに特異的な抗原蛋白質であることが判明した. 次にB.g菌体から莢膜分画を調整しウサギに免疫し抗血清を作成し, 27K蛋白質と反応するかを調べたところ, 良く反応することから, このクローン蛋白質を莢膜蛋白質であると推定した. さらに, 正常人, 歯肉炎, 軽度, 中等度, 重度歯肉炎患者から血清を採取し, 27K蛋白質に対する抗体価をWestern-Blot ELTSA法により分析を試みた. その結果, 歯肉炎でわずかに, 軽度でもっとも高い抗体価を示し, 中等度, 重度ではむしろ低いことが判明した. このことから, 27K莢膜蛋白質に対し, 免疫応答の高いヒトはB.gの感染に抵抗して軽度のまま経過する可能性もあると考えられた. さらに, B.g培養上清より, 赤血球凝集素(H.f)を精製し, ウサギ抗血清を作成し, B.g遺伝子バンクから免疫学的スクリーニングを行った結果, クローン蛋白質40Kを産生するクローンλMDBG2を得た, λMDBG2よりpTZ19プラスミドにサブクローン化したpMD123より40K蛋白質を高度に精製し, 抗血清を作成した. 抗40K蛋白質抗血清は, 著明にB.gのH.f活性を阻害した. さらに抗40KIgGは補体依存性でB.gに対してADCC活性を有することも明らかとなった. 以上の事から27K, 40K蛋白は免疫学的診断ワクチン療法の開発に有用となろう.
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