| 研究概要 |
赤血球分化の制御機構を解明するため, 試験管内で分化誘導可能なマウス赤白血病(MEL)細胞を用い, 分化の決定(コミットメント)過程を解析した. まず, 我々は, MEL細胞TSA8株を誘導剤処理すると, エリトロポエチン(Epo)依存に分化増殖を行なう前駆細胞(CFu-E)へと分化することを見出した. 結合実験の結果より, 分化誘導前後のEpo受容体は, 細胞当りの数, 親和性の変動は無く, CFu-Eへの分化の決定が, Epo受容体の誘導ではなく, 細胞内因子の誘導が重要であることが分った.
この分化誘導系を用い, 分化の決定に関与する要因をさらに詳しく調べた. その結果, 分化誘導直後にシクロヘキシミド感受性の時期があり, 不安定な蛋白の新合成が必要であることが分った. また, 分化誘導の後半に, アミロライド誘導体に感受性の時期が見出され, Na^+/H^+exchangerの関与が明らかとなった. すなわち, この分化の決定には, 二つの因子が逐次的に働いていると予想された. つぎに, Epoの作用機序を解析し, Epoの受容体を介した細胞内シグナル伝達には, CAMPが関与していることを明らかにした. これまで, Epoの作用機序については, 正常血液細胞集団を用いた解析結果が報告されているが, 結果は不明確であり, 均一な前駆細胞を用した我々の結果は最も明確であり, 今後の生化学的解析の材料としても最適である.
MEL細胞の分化の決定におけるがん遺伝子C-mycの関与を, 誘導プロモーターと結合したc-myc遺伝子の導入により調べた. その結果, c-mycは, 分化の決定に, その量に依存して働いていること, また, 分化特異的遺伝子の活性化に抑制的に働いており, c-myc自身のauto-regulationにより, 分化の決定と遺伝子発現を結びつけた調節をしていると予想させる結果が得られた.
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