| 研究課題/領域番号 |
61480468
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
代謝生物化学
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| 研究機関 | 自治医科大学 |
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研究代表者 |
曽根 〓史 (曽根、専史 ノブヒト) 自治医科大学, 医学部, 助教授 (20049034)
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| 研究分担者 |
石塚 盛雄 中央大学, 理工学部, 助教授 (50168241)
香川 靖雄 自治医科大学, 医学部, 教授 (30048962)
西郷 敏 自治医科大学, 医学部, 助教授 (70049071)
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| 研究期間 (年度) |
1986 – 1988
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| 研究課題ステータス |
完了 (1988年度)
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| 配分額 *注記 |
6,000千円 (直接経費: 6,000千円)
1988年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1987年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
1986年度: 3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
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| キーワード | シトクロム酸化酵素 / 好熱性細菌 / プロトンポンプ / 膜タン白質の結晶化 / 遺伝子 / 塩基配列 / タン白質一次構造 / 耐熱性酵素 / 遺伝子構造 / アミノ酸配列 / 好熱菌 / チトクロム酸化酵素 / 膜タンパク質の結晶化 / 高速電子線照射実験による標的分子量 / 好熱菌のチトクロム酸化酵素 / 膜蛋白質の結晶化 |
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| 研究概要 |
1.好熱菌PS3のDNAをEMBLー3ベクターに入れて作ったライブラリーとオリゴヌクレオチドプローブを用いて、チトクロム酸化酵素の遺伝子を得て、これの塩基配列を決定した。サブユニットII、I、III、IVの遺伝子が5'上流からこの順で存在し、1個のオペロンを形成している。これらのサブユニットのアミノ酸配列をすでに報告されているミトコンドリアや細菌のものとしては唯一知られているParaccocusdehifrificansのものと比較することにより、重要なアミノ酸残基の位置や大まかな立体構造のイメージを描くことができた。
2.好熱菌PS3チトクロム酸化酵素の結晶化を試みた。オクチルグルコシドとヘプタントリオールを添加した時、小さな結晶状のものが得られたが結晶解析にはとうてい適さない質のものであった。
3.高速電子線照射による標的分子量は、PS3チトクロム酸化酵素を用いて、酸化活性について9万、H^+ポンプ活性についてダイマーに対応する21万の値を得た。酵素は非イオン界面活性剤の存在ではモノマーで存在するので、ダイマー酵素はリン脂質中で形成されるのかも知れない。
4.チトクロム酸化酵素部位(site3)におけるH^+輸送活性の測定を工夫した。そして実際の測定も行い、また関連する論文にも目を通した上、プロトンの電気化学ポテンシャル差を形成する細菌の呼吸鎖複合体について綜説を記した。
5.今後、発現系と得てより直接的な研究を発展させてゆく。
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