| 研究概要 |
本研究は、交雑不和合性を示す組合せである南米産野生種Solanum stenotomum(2n=24,stenと略す)とメキシコ産野生種S.etuberosum(2n-24,etubと略す)を用い、両種の体細胞雑種を作出することを目的として、a)葉肉及び培養細胞からのプロトプラストの単離とそのカルス形成、b)両種の細胞融合とそのカルス形成、c)カルスからの個体再生とその育成である。1.葉肉プロトプラストは、茎頂培養による無菌植物を得、その無菌葉から単離した。収量は、葉片生重1g当りstenでは約2.1×【10^6】個,etubでは約1.3×【10^6】個であった。培養細胞では、stenの場合約67%,etubでは約60%の作出率でプロトプラストを得た。これらのプロトプラストを培養に移したが、コロニー形成率は極めて低く、葉肉プロトプラストはカルスを形成せず、培養細胞プロトプラストは0.02%の率でカルスを形成した。2.両種の融合細胞の作成には、一方を葉肉(緑色)もう1方を培養細胞プロトプラスト(白色)を用い、色の識別で雑種細胞を単離した。各々のプロトプラストを1×【10^5】個として同数を混合し、PEGにより行った。融合細胞は2〜3回分裂した後増殖を停止し、まだカルスは得られていない。1と2については、現在培養条件を改良中である。これと並行して、葉片由来のカルスからの個体再生を試みた結果、次のことが明らかとなった。2,45-Tはカルスの誘導とその増殖には効果が強いが、不定芽形成には強い阻害を示す。一方、NAAはカルスの誘導と増殖には効果が弱いが、不定芽形成には阻害を示さない。即ち、2,45-TとZeatinを含む培地では、カルスは旺盛な生育を示すが、不定芽を形成せず、NAAとZeatinを含む培地では、カルスの増殖は遅いが、不定芽を形成した。培地からNAAを除去し、Zeatin 5mg/lと【GA_3】5mg/lを加えてカルスを培養すると、約5週間後に不定芽を形成した。形成率は、Stenが62.5% etubが28.2%であった。現在、再生植物を育成中である。
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