| 研究概要 |
植物病原菌を鋭敏に且つ正確に検出することは, 当該の病害の発生予察を敏速に行ない適切な防除対策を計画したり, 植物防疫の場で病原菌の移入を発見する上で大変重要である. 本研究ではクローニングにより取り出した発病遺伝子をプローブとしたDNA-DNAハイブリダイゼーション法により, 特定の病原細菌を検出する方法を確立することを目的とした. プローブの作成はフォトビオチンの光活性化による方法と放射性同位元素のニックトランスレーションによる方法を用いた. 先ず, ソ菜類軟腐病菌Erwinia carotovora Bufsp carotovoraの病原性因子であるペクチン酸リアーゼを生産する遺伝子を含むDNA断片のプローブとしての有用性について調べたところ, コロニーハイブリダイゼーション法, DNAドットブロッティング法及び細菌懸濁液ドットブロッティング法により上記Subsp.cartovoraの他, Subsp atrosepticaやE drysanthemi等の軟腐グループErwinia属細菌と特異的にハイブリダイズした. 検出感度は放射性同位元素を用いた方が高かったが, フォトビオチンプローブは放射性同位元素取り扱いの為の施設や操作を要せず, 又, 一年以上安定に保たれる等, 上記応用の場で大変有用な性質を持っていた. しかし, コロニーハイブリダイゼーションの場合, フォトビオチンプローブが非特異的にコロニーに結合する場合があり, 放射性同位元素を用いるべきと判断される. 次に, フジこぶ病細菌E.heobicola pv.mlletiaeを検出するためのプローブを発病因子と考えられるインドール酢酸の合成酵素の一つトリプトファンモノオキシジェネースに求めた. 本酵素生産遺伝子にトランスポゾン(Tn5)を挿入したところ, 病原性が失われることより, 本酵素が病原性因子であることを確認した後, カナマイシン耐性を指標に大腸菌にクローニングし, 同様な有用性が確認出来た.
|
