| 研究概要 |
細胞における機能と構造との相関を明らかにするにあたっては免疫組織化学的手法により, 細胞内の蛋白質, 糖蛋白など高分子物質の局在を知る事は不可欠である. 本研究においては, 超微形態学的に現在最良とされる急速凍結置換法によって作成された組織片に免疫組織化学的反応を行なうことを目的とし, それを行なうにあたっての技術的障害を克服し, この二つの方法の組み合わせの諸条件を検討し, 最適な条件を開発する事を目的とするものである. 材料としてはラット膵と耳下腺を用い, 急速凍結置換法により組織の超薄切片を作成し, その腺細胞におけるアミラーゼの局在について, 第一抗体として抗ラットアミラーゼ抗体, 第二抗体としてプロテインA-金コロイドを使用したpost-embedding法により免疫染色して, 形態および免疫反応性について検討を行なった.
1.固定剤として, 従来急速凍結置換法に用いられた4%オスミウム/アセトンの他, アルデヒド系の固定剤を使用する為, 今回新たに市販のパラフオルムアルデハイド, ぐるた-るアルデハイドを再蒸溜し, それをアセトンに溶解したものを開発し, 使用した.
2.これらのアルデハイド系の固定剤の使用は, 従来のオスミウムに比し, 非常に良好な免疫反応性をもたらし, かつ, 形態の上からも通常の固定法と見なし生体における組織の状態を良好に保存し得るものであった.
3.包埋剤として, Epoxy resinの他, Aruldite6005Lowicry1K4Mを使用することにより, 良好な状態と免疫反応性の保持をかね備えることが可能となった.
以上, 本研究によって急速凍結置換超薄切片における免疫組織化学的研究が実現可能である事が示され, 又, この研究を通じて外分泌腺の分泌顆粒についての新たな知見を得る事も出来た.
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