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放射光による蛋白質動的構造解析のための時間分解ラウエ法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 62430028
研究種目

一般研究(A)

配分区分補助金
研究分野 生体物性学
研究機関高エネルギー物理学研究所

研究代表者

坂部 知平  高エネルギー物理学研究所, 放射光実験施設, 教授 (30022601)

研究分担者 佐々木 教祐  名古屋大学, 医療技術短期大学部, 助教授 (00022632)
研究期間 (年度) 1987 – 1989
研究課題ステータス 完了 (1989年度)
配分額 *注記
28,700千円 (直接経費: 28,700千円)
1989年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1988年度: 13,500千円 (直接経費: 13,500千円)
1987年度: 13,200千円 (直接経費: 13,200千円)
キーワード蛋白質結晶構造解析 / 時分割ラウエカメラ / 放射光 / イメ-ジングプレ-ト / ωーアミノ酸ピルビン酸アミノ基転移酵素 / G-actin・DNase I complex / ソフトウェア- / 時分割ラウエ法 / wーアミノ酸:ピルピン酸アミノ基転移酵素 / イメ-ジングプレ-ト(BASIII) / 時分制ラウエ写真 / 放射光X線 / w-amino acid pyruvate aminotransjerase / 時間分割型ラウエカメラ / イメージングプレート / wーaminoacid pyruvate amino transferase結晶
研究概要

本研究では酵素反応や蛋白質の光化学反応など種々の反応中に起こる3次元構造の変化を追跡するために時分割ラウエ法の開発を行った。また、本研究の基礎となる静的構造を得るために必要な研究も合せて進めた。
時分割ラウエカメラはシンクロトロン放射光を用いて最高1msecでシャッタ-を切り、しかも連続10回の時間分割を行ったラウエ写真を同一フィルム(実際にはイメ-ジングプレ-トBASIII)上に記録できるように設計した。設計及び製作は回転シャッタ-部、高速メインシャッタ-とフィルム駆動部等開発的要素が多いためKEK工作センタ-との共同で行った。性能テストはωーamino acid pyruvate aminotransferase結晶により行われた。当初最も心配されたフィルムの動き及びシャッタ-部は順調に作動し、カメラ本体の性能は満足できるものであった。しかし、偏向電磁石による放射光ではまだ強度が弱く7ー10msecでシャッタ-を切らないと十分な強度の回折像が得られないことが明らかになった。
時分割ラウエ写真は同一IP上に幾度も重ね撮りをするため通常のラウエ写真に比べてバックグランドが非常に高くなる。そこでまづこのバックグランドを可能な限り減ずることなど種々の改良を試みた。又トリガ-としてレ-ザ-を置くための架台と起動するための装置を作った。すべて順調に可動した。そしてωーAPTにトリガ-としてレ-ザ-光をあてBL6A2において露光1msecで10msec間隙で5点の時分割ラウエ写真の撮影に成功した。これらの結果は本年8月に行われる国際結晶学会で発表する。
また蛋白質の静的構造解析の研究もωーAPT、chicken gizzard Gーactin・DNaseI complex結晶を用いて行われ種々のソフトウェアが開発された。これらの結果も国際結晶学会で発表される。

報告書

(4件)
  • 1989 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1988 実績報告書
  • 1987 実績報告書
  • 研究成果

    (12件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (12件)

  • [文献書誌] 坂部知平、坂部貴和子: "ラウエ法による時分割蛋白質結晶構造解析" 生物物理. 28. 43-46 (1988)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] N.Watanabe,K.Sakabe,N.Sakabe,T.Higashi,K.Sasaki,S.Aibara,Y.Morita,K.Yonaha and S.Toyama: "Crystal Structure Analysis of ω-Amino Acid:Pyrurote Aminotransferase with a Newly Developed Weissenberg Camera and an Imaging Plate Using Synchrotron Radiation" J.Biochem. 105. 1-3 (1989)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] N.Sakabe: "Protein Crystallography Using Imaging Plates and Synchrotron Radiation in the Photon Factory" Acta Cryst.

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] N.Watanabe,K.Sakabe,N.Sakabe & K.Yonaha: "Crystal Structure of ω-Amino Acid:Pyruvate Amino-transferase & Observation of Change in Diffraction by Time Resolved Lave Method" Acta Cryst.

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] N.Sakabe,K.Sasaki,K.Sakabe et al: "Crystal Structure Analysis of Chicken Gizzard G-Actin・DNase I Complex at 2.3 A Resolution." Acta Cryst.

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 分担 N.Watanabe,K.Sakabe,N.Sakabe,K.Sasaki,K.Yonaha,S.Toyama,S.Aibara and Y.Morita: "Proceeding of Protein Engineering '89,分担題Crystdl Structure Analysis of ω-Amino Acid:pyruvate Aminotransferase and Study on Reaction Mechanism Using SR"

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] N.Sakabe: "Protein Crystallography using Imaging Plates and Synchrotron Radiation in the Photon Factory" Acta Cryst.

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] N.Watanabe,K.Sakabe,N.Sakabe et al.: "Crystal Structure of W-Amino acid:Phruvate Aminotransferase and Observation of Change in Diffraction by Time Resolved Lave Method" Acta Cryst.

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] N.Sakabe,K.Sasaki,K.Sakabe et al.: "Crystal Structure Analysis of Chicken Gizzard G-actin・DNase I Complex at 2・3 Å Resolution" Acta Cryst.

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] 分担N.Watanabe,K.Sakabe,N.Sakabe,K.Sasaki,K.Yonaha,S.Toyama,S.Aibara and Y.Morita: "Proceeding of Protein Engineering '89 分担課題Crystal Structure Analysis of W-aminoacid:pyruvate Aminotransjerase and Study on Reaction Mechanism Using SR"

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] 坂部知平、坂部貴和子: 生物物理. 28. 43-46 (1988)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] N.Watanabe;K.Sakabe;N.Sakabe;T.Higashi;K.Sasaki;S.Aibara;Y.Morita;K.Yonabe;S.Toyama;H.Fukutani: J.Biochem.105. 1-3 (1989)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書

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公開日: 1987-04-01   更新日: 2016-04-21  

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