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ギャップ結合細胞間連絡のモノクロ-ナル抗体法による生理学的意義の解明

研究課題

研究課題/領域番号 62440022
研究種目

一般研究(A)

配分区分補助金
研究分野 生理学一般
研究機関広島大学

研究代表者

菅野 義信  広島大学, 歯学部, 教授 (00034158)

研究分担者 廣野 力 (広野 力)  広島大学, 歯学部, 助手 (10199135)
柴 芳樹  広島大学, 歯学部, 助教授 (90110452)
佐々木 康人  広島大学, 歯学部, 助手 (50136090)
研究期間 (年度) 1987 – 1990
研究課題ステータス 完了 (1990年度)
配分額 *注記
10,300千円 (直接経費: 10,300千円)
1990年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1989年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1988年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1987年度: 7,300千円 (直接経費: 7,300千円)
キーワードギャップ結合 / 細胞間連絡 / モノクロ-ナル抗体 / ラット肝臓 / ラット唾液腺 / 培養細胞 / 細胞増殖 / 分泌 / 認識部位 / 発癌 / モノクローナル抗体 / 唾液腺細胞 / Cキナーゼ / 細胞分化 / ギャップ結合蛋白質 / ラット肝細胞 / ラット唾液腺細胞 / 細胞間結合 / 細胞間チャネル
研究概要

本研究は、ギャップ結合蛋白質の分離精製後の抗体作製から、その抗体使用による細胞間連絡の生理機能の解明を目的としている。ギャップ結合蛋白質はラット肝臓から水酸化ナトリウム不溶性分画を採取し、この分画からSDSーポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離精製した。この27KDa蛋白質に対するモノクロ-ナル抗体を通法に従いマウス脾臓細胞とNSー1ミエロ-マ細胞との融合細胞より取得した。抗体はIgGタイプで、ラット肝細胞膜粗分画中の27KDaギャップ結合蛋白質を認識した。肝凍結切片の免疫組識染色で肝細胞の境界に沿って抗体の結合部位が点在した。しかし、心臓や水晶体を免疫組織染色しても全く染色されない。抗体は肝27KDaギャップ結合蛋白質と特異的に結合した。ラットの肝臓のギャップ結合蛋白質の機能を解析するため、コラゲナ-ゼ処理で肝細胞を分離し培養した所、ギャップ結合蛋白質は急速に消失した。ギャップ結合蛋白質は肝細胞増殖に抑制的役割を果たしていると推察された。ギャップ結合細胞間連絡の増殖抑制的役割はマウス線維芽細胞3Tー3ーL1細胞でも同様である。肝臓由来の各種培養細胞は抗体とは反応しないが、蛍光色素の細胞内注入法で調べるとこれら培養細胞には細胞間連絡即ちギャップ結合が存在し、in vitro培養下では別種タイプのギャップ結合蛋白質を発現していると考えられる。ギャップ結合蛋発質発現制御として興味ある事実である。ラット唾液腺の腺房細胞のギャップ結合蛋白質は肝臓ギャップ結合蛋白質と同一であった。唾液腺分泌機能とギャップ結合との関連では、ラット顎下腺で電解質分泌時のギャップ結合機能低下を明らかにした。さらにギャップ結合維持には自律神経系の関与が示された。今後抗体の細胞内注入効率の改善をはかると同時に、別種ギャップ結合蛋白質に対する抗体を用い、各種ギャップ結合の発現ならびに機能の比較検討を行う必要がある。

報告書

(5件)
  • 1990 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1989 実績報告書
  • 1988 実績報告書
  • 1987 実績報告書
  • 研究成果

    (43件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (43件)

  • [文献書誌] 菅野 義信: "唾液腺腺房細胞のギャップ結合の役割を考える" 日本唾液腺学会誌. 31. 11-23 (1990)

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      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yoshiki,Shiba: "Inhibition of gapーjunctional intercellular communication and enhanced bindin of fibronectinーcoated latex beads by stimulation of DNA synthesis in quiescent 3T3ーLl cells" Jounal of Cellular Physiology. 145. 268-273 (1990)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kanno,Yoshinobu: "The regulation and maintenance of the gap junctional intercellular communication in submandibular glands of rat" First APOCB Congess abstracts:94. (1990)

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      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hirono,Chikara: "Monoclonal Antibodies against gap junction protein from rat liver" The Japanese Journal of Physiology. 40. 15-15 (1990)

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      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 佐々木 康人: "分泌刺激後のラット顎下腺ギャップ結合機能の長時的追跡" 日本生理誌. 52. 117-117 (1990)

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      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kanno,Yoshinobu: "Reduction of intercellular communication in submandibular gland acinar cells through calcium influx and protein kinase C by acetylcholine and adrenaline" Elsevier Science Publishers, 99-102 (1990)

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      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 菅野 義信: "電気的結合:新生理学大系,第7巻発生・分化の生理学" 医学書院, 180-188 (1991)

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      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kanno, Yoshinobu: "Effects of denervation on cell-to-cell communication between acinar cells of rat submandibular salivary gland." Archs. Oral Biol.32(1). 43-46 (1987)

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      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sasaki, Yasuto: "Suppression of intercellular communication in acinar cells from rat submandibular gland by cholinergic and adrenergic agonists." Jpn. J. Physiol.38(4). 531-543 (1988)

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      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kanno, Yoshinobu: "Autonomic control of intercellular communication in salivary glands." Proceedings of the Finnish Dental Society. 85(4-5). 301-305 (1989)

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      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Shiba, Yoshiki: "Close relationship between modulation of serum-induced stimulation of DNA synthesis and changes in gap-junctional intercellular communication in quiescent 3T3-L1 cells caused by cyclic AMP and the tumor-promoting phorbol ester TPA." Exp. Cell Res.185(2). 535-540 (1989)

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      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sasaki, Yasuto: "Herbimycin A suppresses the reduction of gap-junctional intercellular communication induced by tumor-promoting phorbol ester in 3T3-L1 cells." Jpn. J. Cancer Res.80(9). 855-860 (1989)

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      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Shiba, Yoshiki: "Inhibition of gap-junctional intercellular communication and enhanced binding of fibronectin-coated latex beads by stimulation of DNA synthesis in quiescent 3T3-L1 cells." J. Cell. Physiol.145(5). 268-273 (1990)

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      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kanno, Yoshinobu: "Reduction of intercellular communication in submandibular gland acinar cells through calcium influx and protein kinase C by acetylcholine and adrenaline." Bioinformatics. Ed by O. Hatase & J. H. Wang. Elsevier Science Publishers. 99-102 (1990)

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      1990 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 菅野 義信: "唾液腺腺房細胞のギャップ結合の役割を考える" 日本唾液腺学会誌. 31. 11-23 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Shiba,Yoshiki: "Inhibition of gapーjunctional intercellular communication and enhanced binding of fibronectinーcoated latex beads by stimulation of DNA synthesis in quiescent 3T3ーLl cells" Jounal of Cellular Physiology. 145. 268-273 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Kanno,Yoshinobu: "The regulation and maintenance of the gap junctional intercellular communication in submandibular glands of rat" First APOCB Congress abstracts:94. (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Hirono,Chikara: "Monoclonal Antibodies against gap junction protein from rat liver" The Japanese Journal of Physiology. 40. 15-15 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] 佐々木 康人: "分泌刺激後のラットの顎下腺ギャップ結合機能の長時的追跡" 日本生理誌. 52. 117-117 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Kanno,Yoshinobu: "Reduction of intercellular communication in submandibular gland acinar cells through calcium influx and protein kinase C by acetylcholine and adrenaline" Elsevier Science Publishers, 99-102 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] 菅野 義信: "電気的結合:新生理学大系,第7巻発生・分化の生理学" 医学書院, 180-188 (1991)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] 菅野義信: "ギャップ結合のバイオロジ-" 生体の科学. 40. 650-657 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Shiba,Yoshiki: "Close ralationship between modulation of serum-induced stimulation of DNA synthesis and changes in gap-junctional intercellular communication in quienscent 3T3-L1 cells caused by cyclic AMP and the tumor-promoting phorbor ester TPA." Experimental Cell Research. 185. 535-540 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Kanno,Yoshinobu: "Inhibition of intercellular communication in acinar cells from rat submandibular gland by acetylcholine and adrenaline." Proceedings of the International Union of Physiological Sciences. 17. 154-154 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Kanno,Yoshinobu: "The autonomic control of intercellular communication in salivary gland." Proceedings of the Finnish Dental Society. 85Suppl 1. 30-30 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Sasaki,Yasuto: "Decrease in intercellular communication between acinar cells of rat submandibular gland after salivary secretion." The Japanese Journal of Physiology. 39. S24-S24 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Sasaki,Yasuto: "Herbimycin A suppresses the reduction of gap-junctional intercellular communication induced by tumor-promoting phorbor ester in 3T3-L1 cells." Japnaese Journal of Cancer Research. 80. 855-860 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Kanno,Yoshinobu: "Bioinformatics" Elsevier Science Publishers, 444 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] sasaki,yasuto: The Japanese Journal of physiology. 38. 531-543 (1988)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] sasaki,yasuto: Journal of The physiological society of Japan. 50. 379-379 (1988)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] Kanno,Yoshinobu: Fourth International Congress of cell Biology Abstracts. 234-234 (1988)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] Sasaki,Yasuto: Cell Structure and Function. 13. 629-629 (1988)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] Sasaki,Yasuto: Journal of Dental Research. 68. (1989)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] Kanno,yoshinobu: Neuroscience Research,Supplement. (1989)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] Kanno,Yoshinobu: "Proceedings of International symposium on Information Transduction and processing in Biological systems" Elsevier science publishers, (1989)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] Kanno, Yoshinobu: Archives of oral Biology. 32. 43-46 (1987)

    • 関連する報告書
      1987 実績報告書
  • [文献書誌] Sasaki, Yasuto: The Japanese Journal of Physiology. 38. (1988)

    • 関連する報告書
      1987 実績報告書
  • [文献書誌] Sasaki, Yasuto: Journal of The Physiological Society of Japan. 49. 336-336 (1987)

    • 関連する報告書
      1987 実績報告書
  • [文献書誌] 菅野義信: 組織培養. 13. 142-145 (1987)

    • 関連する報告書
      1987 実績報告書
  • [文献書誌] 菅野義信: 蛋白質・核酸・酵素. 32. 1460-1463 (1987)

    • 関連する報告書
      1987 実績報告書
  • [文献書誌] 菅野義信: 蛋白質・核酸・酵素. 32. 1176-1180 (1987)

    • 関連する報告書
      1987 実績報告書
  • [文献書誌] 菅野義信: "新生理科学大系5 分泌の生理学" 医学書院, 335 (1987)

    • 関連する報告書
      1987 実績報告書
  • [文献書誌] 菅野義信: "基礎歯科生理学" 医歯薬出版株式会社, 398 (1987)

    • 関連する報告書
      1987 実績報告書

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公開日: 1987-04-01   更新日: 2016-04-21  

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