| 研究課題/領域番号 |
62440039
|
|---|
| 研究種目 |
一般研究(A)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究分野 |
神経内科学
|
|---|
| 研究機関 | 新潟大学 |
|---|
研究代表者 |
宮武 正 新潟大学, 脳研究所, 教授 (50048998)
|
|---|
| 研究分担者 |
佐藤 修三 新潟大学, 医学部附属病院, 講師 (30115034)
渥美 哲至 新潟大学, 脳研究所, 助教授 (50049061)
辻 省次 新潟大学, 医学部附属病院, 助手 (70150612)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1987 – 1988
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1988年度)
|
| 配分額 *注記 |
24,000千円 (直接経費: 24,000千円)
1988年度: 5,000千円 (直接経費: 5,000千円)
1987年度: 19,000千円 (直接経費: 19,000千円)
|
|---|
| キーワード | シアリダーゼ / シアリドーシス / スフィンゴリピドーシス / 分子遺伝学 / 遺伝子異常 / cDNAクローニング / ライソソーム |
|---|
| 研究概要 |
本研究において、遺伝性神経疾患の一つである、シアリドーシスにおける分子レベルでの異常を明らかにすることを目的として、まず、ヒト胎盤からシアリダーゼ蛋白を精製し、シアリダーゼ複合体が78kDa、64kDa、46kDa、30kDa、20kDaの5つのペプチドからなることを明らかにし、このうちシアリダーゼに関連が深いと考えられる46kDaのペプチドについて、アミノ酸部分配列を解析し、2つのアミノ酸配列を得た。これより、2つのオリゴヌクレオチドプローブを作製しcDNAライブラリーをスクリーニングしたところ、両方のプローブにハイブリダイズするクローン(λHS1013)が得られた。このcDNAの塩基配列の解析の結果、先に求めたアミノ酸部分配列と完全なco-lionearityを示すことが判明し、確かに目的のcDNAが得られたことが証明された。しかしながら、このcDNAの長さは全長のものではなかったので、さらに、米国国立衛生研究所の岡山博士から供与されたcDNAライブラリーをスクリーニングすることにより、全長のcDNAを単離することができた。現在、この全長のcDNAの塩基配列の解析が終了しており、大腸菌による46kDaの蛋白の産生とその精製にも成功しており、また、この蛋白がヒト胎盤から精製して作製した抗46kDa抗体とcross-reactすることも証明した。ヒトシアリダーゼ複合体に含まれるサブユニットの個々のペプチドの機能については、まったく不明であるので、我々が、単離した全長のcDNAをCOS細胞等において発現させ、その機能を解析中であり、さらに、ヒトにおいていくつか知られているシアリダーゼ欠損症における遺伝子異常についても、サザーン解析、ノーザン解析等により、検討を加えている。
|
