| 研究課題/領域番号 |
62470142
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
病態検査学
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| 研究機関 | 新潟大学 |
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研究代表者 |
屋形 稔 新潟大学, 医学部, 教授 (20018352)
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| 研究分担者 |
杉田 収 新潟大学, 医学部附属病院, 講師 (10092701)
山田 俊幸 新潟大学, 医学部附属病院, 助手 (50211636)
内山 一晃 新潟大学, 医学部附属病院, 医員
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| 研究期間 (年度) |
1987 – 1989
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| 研究課題ステータス |
完了 (1989年度)
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| 配分額 *注記 |
1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1989年度: 400千円 (直接経費: 400千円)
1988年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
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| キーワード | モノクロ-ナル抗体 / 腫瘍関連抗原 / ヒト-マウスヘテロハイブリド-マ / Carcinoembryonic antigen / Nonspecific cross-reacting antigen / Non specific cross-reacting antigen / ヒト-マウスヘテロハイブリドーマ / 糖鎖抗原 / isoprotein / モノクローナル抗体 / 癌特異抗体 / ヒトーマウスヘテロハイブリドーマ |
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| 研究概要 |
1.ヒト型モノクロ-ナル抗体
(1)ヒト型モノクロ-ナル抗体の作成。ヒト末梢血及びリンパ節のリンパ球とマウスミエロ-マ細胞P3U1または、Ag8.653とを細胞融合した。
(2)ヒト-マウスヘテロハイブリド-マの抗体産生の安定性。このハイブリド-マのヒトκ型、λ型L鎖、H鎖の安定性につきcytoplasmicstainingをして検索したところ、ヒトκ型L鎖はλ型L鎖、H鎖に比較して遙かに不安定であり、クロ-ニングしずらい事がクロ-ンレベルおよび遺伝子レベルでもsouthern blot分析にて明かになった。
(3)ヒト型モノクロ-ナル抗体の抗原特異性。抗体産生ハイブリド-マ細胞は、各種腫瘍細胞とのcell target ELISAにより、7個のクロ-ンが陽性クロ-ンとなり、5クロ-ンがクロ-ニングされた。このアイソタイプは全てIg M、λ型であった。しかし、この抗体は、アルブミンとも反応することから、腫瘍関連抗原に対するモノクロ-ナル抗体ではなく、抗アルブミン抗体として自己抗体の可能性、及び、高濃度の分泌量の為に非特異的に吸着した可能性等も考えられた。
2.マウス型モノクロ-ナル抗体(1)モノクロ-ナル抗体の作成。ヒト腫瘍抗原の性状を探究する目的で、膵臓癌細胞株BxPC-3をBALB/Cマウスに免疫してマウスミエロ-マ細胞PAIとで細胞融合した。CEA関連抗原であるNCA(nonspecific cross-reacting antigen)と強く反応するクロ-ンを選んだ。
(2)ヒトCEA関連抗原蛋白の性状。 SDS-PAGEにて解析した結果ではNCAが複数の蛋白である事が明かになった。これをそれぞれ分子量の違いからNCA-90とNCA-55と言い、消化器癌細胞株ではNCA-9、顆粒球中ではNCA-55が多く存在する。また、NCA-55は多形性があり4種の等電点(pH4.8,5.2,5.6,5.8)を持つ事も判明した。
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