| 研究課題/領域番号 |
62480046
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
蚕糸学
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| 研究機関 | 大阪府立大学 (1988)
東京農工大学 (1987) |
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研究代表者 |
姫野 道夫 大阪府立大学, 農学部, 教授 (10026411)
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| 研究分担者 |
和田野 晃 大阪府立大学, 農学部, 講師 (40081575)
重松 正矩 東京農工大学, 工学部, 助手 (90015032)
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| 研究期間 (年度) |
1987 – 1988
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| 研究課題ステータス |
完了 (1988年度)
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| 配分額 *注記 |
6,400千円 (直接経費: 6,400千円)
1988年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
1987年度: 4,900千円 (直接経費: 4,900千円)
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| キーワード | フイブロイン / フイブロイン結晶領域蛋白質 / 絹蛋白質 / 蛋白質工学 / 融合蛋白質 / β-ガラクトシダーゼ / フィブロイン / フィブロイン遺伝子 / フィブロイン結晶領域 / ベッター作成 / 遺伝子改変 |
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| 研究概要 |
絹フイブロインは衣料繊維素材としてのみならず、医療用材料、酵素固定化担体などのハイオ素材として期待されている。そこで本研究は家蚕フイブロインをより新規な繊維素材、バイオ素材として改変、開発するため遺伝子操作法により改良しようとするものである。家蚕フイブロインの特徴的なアミノ酸配列(-Ser-Gly-Ala-Gly-Ala-Gly-)により反応性の富んだアミノ酸を付加しようとしている。即ち、反応性の富んだアミノ酸として、リジンやメチオニンを加えて、大腸菌中でその改変遺伝子を発現させようとした。
まず、フイブロイン断片などの生理活性のない蛋白質の検出用ベクターとしてp41を作成した。即ち、組み込んだ断片がβ-ガラクトシダーゼ(β-gal)との融合蛋白質として発現して、β-gal活性を示すものである。次で、フイブロイン遺伝子を組み込んだプラスミドpBmF_6よりフイブロイン結晶領域蛋白質(Fcp)コードする部分を制限酵素で切り出しp41にクローニングした。又pBmF_6全体を制限酸素AluIで部分分解してp41に連結したプラスミドpFCPやpFKBを大腸菌JM109に導入した。Fcpの繰り返し配列部分の遺伝子に対応する塩基配列をDNAシンセサイザーで4種類作成しp41に組み込んだ。又、モデルDNAをリガーゼで高分子量に重合させたものをp41に組み込んだプラスミドpFMSなどを作成した。これらのプラスミド中のフイブロイン遺伝子部分は大腸菌で容易に欠失してしまうことがプラスミドのDNA再抽出実験で明らかになった。そのDNAは30bp〜220bpとなり大部分は30bpになっていた。これらの大腸菌のβ-galとの融合蛋白質として発現した。ネズミで作った抗Fcp血清と反応し、大腸菌中でもFcpペプチドとして発現した。Western Blotting法を用いて大腸菌中で作られたFcp様蛋白質はポリアクリルアミド・ゲル電気泳動でβ-galよりも低分子量の位置に検出された。
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