| 研究課題/領域番号 |
62480154
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
細菌学
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
大西 克成 徳島大学, 医学部, 教授 (10037400)
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| 研究分担者 |
木内 武美 徳島大学, 医学部, 講師 (80136217)
小野 恒子 徳島大学, 医学部, 助手 (40035514)
秋本 茂 徳島大学, 医学部, 講師 (10159337)
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| 研究期間 (年度) |
1987 – 1989
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| 研究課題ステータス |
完了 (1989年度)
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| 配分額 *注記 |
6,300千円 (直接経費: 6,300千円)
1989年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1988年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
1987年度: 3,800千円 (直接経費: 3,800千円)
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| キーワード | バクテロイデス属 / 病原性 / 遺伝子クロ-ニング / ノイラミニダ-ゼ / DNA塩基配列 / 易動化 / エレクトロポレ-ション / 正の選択ベクタ- / 偏性嫌気性菌 / バクテロイデス / 遺伝子発現 / 遺伝子クローニング / neruaminidase / エレクトロポレーション / 組換え体選択ベクター / Bacteroides gingivalis / Bacteroides fragilis / トリプシン様プロテアーゼ / neuraminidase / DNase / shultle vector |
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| 研究概要 |
1.Bacteroides fragilisのノイラミニダ-ゼ遺伝子の解析
(1)Bacteroides fragilis YCH46株のノイラミニダ-ゼ遺伝子(nanH)をコスミドベクタ-pHC79にクロ-ン化した。得られたプラスミドpOT2633を用いてnanH遺伝子のサブクロ-ニングを行った結果、nanH遺伝子は1.8kbのXhoIーKpnI断片上に存在していた。
(2)nanH遺伝子を含む領域のDNA塩基配列を決定したところ、296個のアミノ酸をコ-ドする888bpのopen reading frame(ORF)が存在し、これがnanH構造遺伝子の可能性が高いものと思われる。このORFより推定されるアミノ酸配列と既知の細菌ノイラミニダ-ゼとを比較したが、相同性の認められるものはなかった。
(3)大腸菌とBacteroides とのシャトルベクタ-pVALー1に、nanH遺伝子を含む5.4kbのBamHIーSalI断片を挿入したプラスミドpKK105で大腸菌HB101(R751)株を形質転換し、nanHのKK105株を得た。このKK105株からノイラミニダ-ゼ陰性のB.uniformis BU1001株にnanH遺伝子を易動化によって伝達し、ノイラミニダ-ゼ陽性のTY105ー119株を得た。TY105-119株のノイラミニダ-ゼ活性は大腸菌KK105株の1600倍であった。
2.エレクトロポレ-ションによって、シャトルベクタ-pVALー1をBacteroides thetaiotaomicron5482株に伝達できることを明らかにした。最適条件における伝達効率は3×10^5/ug DNAであった。
3.致死遺伝子pndを利用して、組換え体を保有する大腸菌のみが生育出来るような(すなわち正の選択が可能な)ベクタ-pUCST5を作製した。
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