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分子遺伝学的手法によるIII型高脂血症の発症機構に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号 62480251
研究種目

一般研究(B)

配分区分補助金
研究分野 内分泌・代謝学
研究機関京都大学

研究代表者

中井 義勝  京都大学, 医学部, 講師 (10115892)

研究期間 (年度) 1987 – 1988
研究課題ステータス 完了 (1988年度)
配分額 *注記
500千円 (直接経費: 500千円)
1988年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
キーワードアポ蛋白E / III型高脂血症 / 点突然変異 / DNA増幅 / ポリメラーゼ チェーン反応 / 合成オリゴヌクレオチド / RNAプローブ / 遺伝子型 / 相補性DNA / 高脂血症 / ライポプローブ / 制限酵素 / SP64プラスミッド / βーVLDL
研究概要

遺伝子工学的手技を用いてアポ蛋白E異常遺伝子保有者の変異部位を明らかにした。またアポ蛋白Eの変異部位と高脂血症の関係を検討し、アポ蛋白Eの生理活性部位を明確にした。以上の方法によりIII型高脂血症の発症機構を明らかにした。
1.アポ蛋白EmRNAに対する相補性DNA(cDNA)をSP64プラスミッドに組み込ませ、SP6RNAポリメラーゼを使用して^<32>PラベルしたアポEライボプローブを作製した。
健常人および高脂血症患者の白血球細胞中からDNAを抽出し、制限酵素EcoRIで切断した。このDNAとRNAプローブを用いて、アポEDNAの変異部位を明らかにした。
2.1の方法では、被験者白血球からDNAを抽出し、これを材料としている。従って試料の量が限定されるため、手技が容易でない。そのため目的領域のDNA増幅をDNAポリメラーゼTaqポリメラーゼを用いて行った(ポリメラーゼ チェーン反応PCR法)。このPCR法によるDNA増幅と合成オリゴヌクレオチドを用いてアポE遺伝子点突然変異の検出を行った。
アポEイソフォームのE_2型では、526番目の塩基シトシン(C)がチミジン(T)に点突然変異していることが明らかとなった。そのため158番目のアミノ酸アルギニンがシステインに変化しているものと推定された。このためE_2型では、アポE受容体との結合が低下し、βーVLDLを生じやすくなるものと思われる。
今後は、PCR法によってDNA増幅を行い、これを直接シークエンスすることにより、未知のアポE遺伝子点突然変異を明らかにすることが可能となり、III型高脂血症のマススクリーニングも可能となる。

報告書

(3件)
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  • [文献書誌] 妹尾圭子,中井義勝,塚田俊彦 他: 動脈硬化.

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  • [文献書誌] 妹尾圭子,中井義勝,塚田俊彦 他: 動脈硬化.

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  • [文献書誌] K.,Senoo;Y.,Nakai;T.,Tsukada;et al: Atherosclerosis.

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  • [文献書誌] Y.,Nakai;T.,Koh;T.,Tsukada;et al: Metabolism.

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  • [文献書誌] S.,Tsujii;Y.,Nakai;J.,Fukata;et al: Peptides. 8. 1075-1078 (1987)

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  • [文献書誌] S.,Tsujii;Y.,Nakai;J.,Fukata;et al: Endocrinol.Japon.34. 903-909 (1987)

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  • [文献書誌] T.,Usui;Y.,Nakai;T.,Tsukada;et al: Mol.Endocrinol.2. 871-875 (1988)

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  • [文献書誌] Y.,Nakai;T.,Tsukada;T.,Usui;et al: Prog.in endocrinol.edited by Imura,H. et al. 737-742 (1988)

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  • [文献書誌] S.,Tsujii;Y.,Nakai;H.,Takahashi;et al: Brain Res.475. 371-375 (1988)

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  • [文献書誌] 中井義勝,辻井悟,深田川順一 他: 日本肥満学会. 102-104 (1988)

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  • [文献書誌] Nakai, Y.: "Apolipoprotein E polymorphism and hyperlipidemia." Arteriosclerosis.

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  • [文献書誌] Senoo, K.: "Rapid diagnosis of apolipoprotein E isoform by a new method of DNA analysis." Atherosclerosis.

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  • [文献書誌] Nakai, Y.: "Pathogenesis of hypercholesterolemia in anorexia nervosa." Metabolism.

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  • [文献書誌] Usui, T.: "Expression of adrenocorticotropin-releasing hormone (CRH) precursor gene in placenta and other non-hypothalamic tissues in man." Mol. Endocrinol.2. 871-875 (1988)

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  • [文献書誌] Tsujii, S.: "Effect of food deprivation on regional brain glucose utilization in lean and fatty Zucker rats." Brain Res.475. 371-375 (1988)

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  • [文献書誌] Nakai, Y.: Proopiomelanocortin (POMC) synthesis in the pituitary and non-pituitary tissues.Elsevier Science Publishers B.V., 737-742 (1988)

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      1988 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 妹尾圭子,中井義勝,塚田俊彦 他: 動脈硬化.

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      1988 実績報告書
  • [文献書誌] 妹尾圭子,中井義勝,塚田俊彦 他: 動脈硬化.

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      1988 実績報告書
  • [文献書誌] 妹尾圭子,中井義勝,塚田俊彦 他: 動脈硬化.

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      1988 実績報告書
  • [文献書誌] K.Senoo;Y.Nakai;T.Tsukada;et al: Atherosclerosis.

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      1988 実績報告書
  • [文献書誌] Y.Nakai;K.Senoo;H.Kawamura;et al: Atherosclerosis.

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      1988 実績報告書
  • [文献書誌] Y.Nakai; T.Koh;T.Tsukada;et al: Metabolism.

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      1988 実績報告書
  • [文献書誌] S.Tsujii;Y.Nakai;J.Fukata;et al: Peptides. 8. 1075-1078 (1987)

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      1988 実績報告書
  • [文献書誌] S.Tsujii;Y.Nakai;J.Fukata;et al: Endocrinol.Japon.34. 903-909 (1987)

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      1988 実績報告書
  • [文献書誌] T.Usui;Y.Nakai;T.Tsukada;et al: Mol.Endocrinol.2. 871-875 (1988)

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      1988 実績報告書
  • [文献書誌] Y.Nakai;T.Tsukada;T.Usui;et al: Prog.in endocrinol.edited by Imura,H.et al. 737-742 (1988)

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      1988 実績報告書
  • [文献書誌] S.Tsujii;Y.Nakai;H.Takahashi;et al: Brain Res.475. 371-375 (1988)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] 中井義勝,辻井悟,深田順一 他: 日本肥満学会. 102-104 (1988)

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      1988 実績報告書
  • [文献書誌] 妹尾圭子;中井義勝;塚田俊彦他: 動脈硬化.

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      1987 実績報告書
  • [文献書誌] K.Senoo;Y.Nakai;T.Tsukada et al: Atherosclerosis. in preparation.

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      1987 実績報告書
  • [文献書誌] Y.Nakai;T.Koh;T.Tsukada et al: Metabolism. in preparation.

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      1987 実績報告書
  • [文献書誌] T.Tsujii;Y.Nakai;J.Fukata et al: Peptides. 8. 1075-1078 (1987)

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      1987 実績報告書
  • [文献書誌] T.Tsujii;Y.Nakai;J.Fukata et al: Endocrinol.Japon.34. 903-909 (1987)

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      1987 実績報告書
  • [文献書誌] T.Uaui;Y.Nakai;H.Jingami et al: Molecular Endocrinology.

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公開日: 1988-04-01   更新日: 2016-04-21  

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