| 研究課題/領域番号 |
62550722
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
発酵工学
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| 研究機関 | 熊本工業大学 |
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研究代表者 |
小川 隆平 熊本工業大学, 工学部, 助教授 (40029244)
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| 研究分担者 |
藤井 隆夫 熊本工業大学, 工学部, 助手 (80165331)
福田 秀雄 熊本工業大学, 工学部, 教授 (10150830)
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| 研究期間 (年度) |
1987 – 1988
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| 研究課題ステータス |
完了 (1988年度)
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| 配分額 *注記 |
1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
1988年度: 300千円 (直接経費: 300千円)
1987年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
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| キーワード | エチレン / Penicillium digitatum / エチレン生成酵素 / αーケトグルタール酸 / α-ケトグルタール酸 / L-アルギニン |
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| 研究概要 |
Penicillium digitatum IFO 9372の産生するエチレン生成酵素を電気泳動的に単一にまで精製した。この精精プロセスは、菌体をダイノミルで破砕、遠心後、その上澄部分をcell-free extractとして用いた。これを60%硫安塩析し、沈澱部分をストレプトマイシン処理、DEAE Sepharose CL-6B、Butyl-toyopearl、Sephadex Gー100、BioーGel HT Arginine Sepharoseを通して、ポリアクリルアミドディスク電気泳動、SDS電気泳動で単一蛋白質であることを確認した。この蛋白質は分子量42、000ダルトンからなるモノマー蛋白質で、αーketoglutarate、L-Arginine,Fe(II)、Dithiothreitol、酸素が酵素反応に必須であった。本酵素は、αーketoglutarateを絶対的に要求する基質特異性が厳密な酵素であった。また、LーArgimineの代替物質を検討したが、DーarginineがLーarginineの約1%位の活性を示すのみで、Lーarginineに特異性が強い酵素であった。つぎに、この精製酵素を用い、〔Uー^<14>C〕ーαーketoglutorateから、^<14>CーC_2H_4と^<14>CーCO_2の生成モル比を測定し、次の反応式を構築した。
HOOCーCH_2ーCH_2ーCOーCOOH+O_2→C_2H_4+3CO_2+H_2O
以上の性質を植物起源のエチレン生成酵素や、αーketoglutarate-dependent dioxygenaseの性質の比較検討した。
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