| 研究課題/領域番号 |
62560199
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
水産学一般
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| 研究機関 | 宮崎大学 |
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研究代表者 |
青木 宙 宮崎大学, 農学部, 助教授 (00051805)
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| 研究分担者 |
北尾 忠利 宮崎大学, 農学部, 教授 (60094075)
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| 研究期間 (年度) |
1987 – 1988
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| 研究課題ステータス |
完了 (1988年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1988年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
1987年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
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| キーワード | 魚類病原菌 / Pasteurella piscicida / 簡易同定法 / 特定遺伝子 / プローブ / ハイブリダイゼーション / Vibrio anguillarum / 遺伝子構造 / 迅速同定法 |
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| 研究概要 |
魚類病原菌より特定遺伝子をクローン化し、それをプローブとしたハイブリダイゼーション法による魚類病原菌Pasteurella piscicidaおよびVibrie anguillarumの簡易迅速同定法の開発を目的とした。
1.P.piscicidaよりクローン化したDNA断片の長さは692bPで、そのGC含量は、39.2%であった。このクローン断片は他の魚病細菌あるいは近縁種と考えられているP.multocida、P.haemolyticus等と相同性をまったく示さず、P.piscicidaのみ有する特定遺伝子であることが明らかとなった。
2.V.anguillarumより得られたDNA断片は562bPで、GC含量は38.8%であった。この断片は他のVibrio種、V.alginolyticus、V.parahaemolyticus等の16種および他の魚類病原菌とはハイブリッドを形成せず、V.anguillarum特定の遺伝子であることが明らかとなった。
3.P.piscicidaよりクローン化した692bP断片をPhotobiotinで標識し、ハイブリダイゼーションを行ったところ、P.piscicidaとのみハイブリッドの形成が確認できた。DNA3.9ng量までハイブリッドの形成が認められ、^<32>Pで標識したプローブのハイブリッドの検出限界値と変わらなかった。
4.細菌性類結節症に罹病したハマチの腎臓あるいは脾臓の血液をニトロセルロースフィルターに直接塗沫し、P.piscicidaの特定遺伝子プローブとハイブリダイゼーションを行ったところフィルター上でハイブリッドの形成が認められた。
以上、P.piscicidaおよびV.anguillarumより特定遺伝子をクローン化し、それを^<32>Pのみならずphotobiotinで標識しプローブとして用いたところ、それ自身の菌とのみハイブリッドを形成した。さらに、分離培地を用いなくても臓器より直接ニトロセルロースフィルターに塗沫し、プローブハイブリダイゼーションを行うことにより原因菌の検出が可能となった。
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