| 研究課題/領域番号 |
62570102
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
医化学一般
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| 研究機関 | 富山医科薬科大学 |
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研究代表者 |
小川 宏文 富山医科薬科大学, 医学部, 助教授 (30111743)
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| 研究分担者 |
藤岡 基二 富山医科薬科大学, 医学部, 教授 (30030000)
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| 研究期間 (年度) |
1987 – 1988
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| 研究課題ステータス |
完了 (1988年度)
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| 配分額 *注記 |
300千円 (直接経費: 300千円)
1988年度: 300千円 (直接経費: 300千円)
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| キーワード | ラット肝酵素 / セリン脱水酵素 / スレオニン脱水酵素 / クローニング / 遺伝子の構造 / コンセンサス配列 / アミノ酸配列 / 試験管内転写実験 / 核抽出液 / グアニド酢酸メチラーゼ / 遺伝子クローニング / プロモーター / グルココルチコイドレスポンスエレメント / GRE |
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| 研究概要 |
本テーマの遂行に当り、既に得られているラット肝グリシンメチラーゼやアデノシルホモシステナーゼcDNAの他に、当室で研究を行なってきた誘導酵素、セリン脱水酵素の遺伝子を材料とすることは更に有用と考えられたので、本酵素のcDNAクローニングを行なった。ラット肝cDNAをもつ発現ベクターλgt11から、抗体法でスクリーニングを行なった。5個の陽性クローンの内、1個が真のクローンであることがハイブリッドセレクト翻訳法から示された。塩基配列の決定、及びタンパクの部分構造から、本酵素は362個のアミノ酸からなるダイマータンパクであることが分かった。このcDNAをプローブとしてmRNAの大きさをゲルブロット法から調べたところ1500塩基であった。また高タンパク食と無タンパク食で飼育したラット肝からmRNAを抽出し、ゲルブロットを行なったところ、後者のサンプルには本mRNAが検出されなかった。これはmRNAの合成が転写段階で調節されていることを示唆するもので興味深い。次にcDNAをプローブとして、遺伝子クローンを分離することに成功した。塩基配列の決定から、本遺伝子は9個のエクソンと8個のイントロンからなることが分かった。各エクソンとイントロンの境界の配列はgt/agのルールに従っていた。この遺伝子の5′側上流には、他の遺伝子の転写調節に重要であるといわれているいくつかのコンセンサス配列に類似の構造が見出された。例えばグルココルチコイド応答配列(-2240と-240)、CAAC box、GC box、SV40エンハンサーコアエレメントなどである。本遺伝子のプロモーターの機能を調べるために5′側に隣接する部位をクローニングし、更に部分的にこの領域内の配列を欠くプラスミドをつくり、種々のエサで飼育したラット肝の核抽出液を用いて試験管内転写実験を行なっている。
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