| 研究課題/領域番号 |
62570127
|
|---|
| 研究種目 |
一般研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究分野 |
病態医化学
|
|---|
| 研究機関 | 山梨医科大学 |
|---|
研究代表者 |
岡田 芳家 山梨医科大学, 医学部, 助教授 (70037274)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1987 – 1988
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1988年度)
|
| 配分額 *注記 |
1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
1988年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
1987年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
|
|---|
| キーワード | エステラーゼD / 網膜芽細胞腫 / ヒト赤血球 / 遺伝子診断 / 制限酵素切断片多型 / cDNAクローニング / λgt_<11> / 染色体13番 / エステラーゼ D / λgt11 / 制限酵素切断断片多型 / λgtII |
|---|
| 研究概要 |
1.ヒト赤血球から、エステラーゼDー1とDー2を高度に精製し、その性質を調べた。
2.精製エステラーゼDー1に対するウサギ抗体を作成し、生じた抗体がエステラーゼDに対して特異的に反応することをウェスタンブロット法で確かめた。
3.精製エステラーゼDー1標品を、タンパク質分解酵素で消化後、高速液体クロマトグラフィーでペプチドを分取し、9個のペプチドについて、そのアミノ酸配列を決定した。
4.2.で得た抗体を使って、ヒト胎盤λgt_<11>cDNAライブラリーをスクリーニングし、ポジティブクローンを得た。
5.ポジティブファージクローンを増やし、cDNA部分を切り出して、pUC9へサブクローン化した。
6.得られたcDNAの大きさは、約300塩基対で、ジデオキシ法で決定した塩基配列の中に、3で得られたペプチドのアミノ酸配列に相当する部分が含まれていた。
7.さらに長いcDNAを含むクローンを入手すべく、再度ヒト胎盤λgt_<11>cDNAライブラリーをスクリーニングした所、約1200塩基対を含むcDNAクローンが得られた。
8.このcDNAについて塩基配列を求めた所、5′ー末端部分にタンパク合成の開始コードンであるメチオニンが含まれていなかったので、cDNAの5′ー末端側部分をプローブとして、再度ヒト胎盤λgt_<11>cDNAライブラリーをスクリーニングしている。
|
