| 研究課題/領域番号 |
62570195
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
細菌学
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| 研究機関 | 静岡県立大学 |
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研究代表者 |
柳原 保武 静岡県立大学, 薬学部, 教授 (30046255)
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| 研究分担者 |
増澤 俊幸 (増沢 俊幸) 静岡県立大学, 薬学部, 助手 (10181645)
清水 忠順 静岡県立大学, 薬学部, 助手 (40046298)
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| 研究期間 (年度) |
1987 – 1988
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| 研究課題ステータス |
完了 (1988年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1988年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1987年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
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| キーワード | レプトスピラ / ワクチン / 単クローン抗体 / 感染防御抗原 / 糖脂質抗原 / 活性酸素 / マクロファージ / 感染防御 / 感作凝集試験 / Leptospira interrogons / serorar lai 017株 / マクローファージ |
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| 研究概要 |
1.レプトスピラに対する単クローン抗体の作製と分類への応用、病原レプトスピラ(レプト)lai017株に対する単クローン抗体を細胞融合法により作製した。得られた単クローン抗体はレプト血清型、または血清群に特異的な凝集活性を示し、レプト分類に利用が可能であった。さらに、備品として購入した高速液体クロマトグラフィーを用いて単クローン抗体を精製したのち、本単クローン抗体を用いてレプト感染防御凝集抗原の解析を行なった。
2.抗原の抽出、精製、lai017株を大量培養(400l)(、菌体よりクロロホルム-メタノール-水法により抗原を抽出し、シリカゲルクロマトグラフィーにより分子量23-30kdの糖脂質性感染防御凝集抗原(PAG)を得た。
3.ワクチン活性、ハムスターを用いた実験でPAGは従来最も強力な感染防御抗原とされる外膜(Outer envelope、OE)と同等の感染防御活性を示し、成分ワクチンとして有望である事を初めて明らかにした。OE画分の感染防御活性成分がPAGであることをSDS-PAGE、イムノブロット法により初めて明らかにした。
4.免疫原性の検討 OE画分、全菌体(WC)、PAGで免疫されたマウス血清中には、レプト感染防御に重要と考えられる凝集抗体ならびにオプソニン化抗体が誘導されていた。レプト感染防御因子のひとつが、オプソニン化抗体により誘導される活性酸素である事を示唆した。
5.レプト症診断法の確立 PAG並びにWCを抗原として、ELISA法、イムノブロット法、感作赤血球凝集法等について、ヒト血清、ウシ血清、犬血清、レプト免疫ウサギ血清を用いて検討した。この内感作赤血球凝集試験法はPAGを感作抗原として用いた時、WCに比較して2〜8倍の感度の上昇を認め、簡便で有効な診断法と成る事が明らかになった。今後、赤血球に代る人工担体、ラテックスを用いたレプト症臨床検査試案の開発を進めたい。
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