| 研究課題/領域番号 |
62570206
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
ウイルス学
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| 研究機関 | 東海大学 |
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研究代表者 |
伊原 征治 (井原 征治) 東海大学, 医学部, 助教授 (50096202)
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| 研究分担者 |
渡辺 泰 東海大学, 医学部, 教授 (60055746)
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| 研究期間 (年度) |
1987 – 1988
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| 研究課題ステータス |
完了 (1988年度)
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| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1988年度: 400千円 (直接経費: 400千円)
1987年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
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| キーワード | ヒトサイトメガロウイルス / マーカーレスキュー / DNA複製 / 温度感受性変異株 / DNAポリメラーゼ / マーカーレスキュー法 / DNA塩基配列 |
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| 研究概要 |
ヒトサイトメガロウイルス温度感受性変異株のうち、非許容温度でDNA合成が停止する株を選びその変異点をマーカーレスキュー法で決定し、DNA合成に関連する遺伝子の同定とその機能の解析を行なってきた。分析した変異株は2つの相補群に属する4株である (相補群I:ts256、相補群II:ts380、ts589、ts614) 。マーカーレスキューは初めは大きな領域をカバーするコズミッドクローンを使い変異点の大よその場所を決め、順次小さなDNA断片でマーカーレスキューすることで次第に変異点で狭い範囲内にしぼりこみ最後はDNA塩基配列を決め野生株との差を調べた。その結果
1.相補群Iのts256の変異はコズミッドクローンplt212 (map unit 0.22〜0.37でレスキューされた。相補群IIは3株ともmap unit0.37〜0.52のplt248でレスキューされた。
2.ts256は、次いで、HindIII-D断片で、相補群IIの3株はHindIII-A断片でレスキューされた。
3.さらにts256は、HindIII-D断片のサブクローン (BamHl、EcoRl、XbaI断片) でレスキュー実験を行ない、変異点を5.1Kb内までしぼりこんだ。
4.この5.1KbのDNA断片の塩基配列を両鎖共に決定し、野生株との比較を行なった。この結果、この領域には2つのopen reading frameがある。そのうちの1つのORF1はDNApolymerase遺伝子DNA塩基配列と同一であるが、もう1つのORF2はまだ発表されていないもので、DNA合成に関連し、かつDNApolymeraseの発現に必要なものであることがわかった。
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