| 研究課題/領域番号 |
62570291
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
法医学
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
長澤 浩平 九州大学, 医学部, 講師 (00108721)
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| 研究分担者 |
山内 保生 九州大学, 医学部, 医員
YAMAUCHI Yasuo Faculty of Medicine, Kyushu University, Resident
山内 保夫 九州大学, 医学部, 医員
久志本 孝一 九州大学, 医学部, 医員
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| 研究期間 (年度) |
1987 – 1988
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| 研究課題ステータス |
完了 (1988年度)
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| 配分額 *注記 |
400千円 (直接経費: 400千円)
1988年度: 400千円 (直接経費: 400千円)
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| キーワード | MOLT-3 / TPA / 分化誘導 / レセプター / 情報伝達 / PKC / translocation / Ca^<2+> / リン酸化 / PK-C |
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| 研究概要 |
ヒト悪性Tリンパ球(MOLT-3)が代表的なphorbol esterである。12ーO-tetradecanoylphorbol-13-acetate(TPA)によって分化誘導されることはすでに報告した。本研究ではこのTPAによるMOLT-3の分化誘導機構におけるphorbol esterに対するレセプター、および細胞内情報伝達物質としてのprotein kinase C(PKC)やCa^<2+>の役割について、MOLT-3よりTPAに抵抗性のsubclone(RO1-RO5)を作製し、MOLT-3と比較することにより検討した。phorbol esterに対するレセプターの解析は〔^3H〕phorbol-12,13-dibatyrate(PDB)の細胞への結合を測定することによって行った。TPA抵抗性のsubcloneでは全て、〔^3H〕PDBの結合がMOLT-3に比べ約50%に低下しており、その原因はScatehard解析により、subcloneではphorbol esterに対するレセプター数がMOLT-3の50%程度にしかすぎないことにあることが判明した。この結果より、MOLT-3のTPAによる分化誘導にはphorbol esterに対するある一定数以上のレセプターが必要であるという結論が得られた。
RO1〜RO5の5種類のTPA抵抗性subcloneのPKC活性を測定した結果、細胞質分画でいずれもMOLT-3におけるそれの40ー50%に低下していた。MOLT-3にTPAの刺激を加えると、PKC活性は細胞質から膜への著明な移動(translocation)が認められた。一方、RO1では同様のパターンを示したものの、その絶対量はわずか20%程度であった。また、TPA刺激による蛋白のリン酸化の差異を電気泳動のオートラジオグラフィーによって検討した。その結果、リン酸化された蛋白のパターンはほぼ同様であったが、20K、25K、34Kの蛋白のリン酸化の程度はP.01-R05のすべてにおいて、MOLT-3よりも減弱していた。以上のように、PKC活性はMOLT-3のTPAによる分化誘導に重要な役割を担っていることが示唆された。さらに、Ca^<2+>の役割を検討するために、MOLT-3にTPAに加え、イオノマイシンを作用させたところ、増殖、形態の変化が著明となり、Ca^<2+>の補助的役割も示唆された。
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