| 研究課題/領域番号 |
62570367
|
|---|
| 研究種目 |
一般研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究分野 |
神経内科学
|
|---|
| 研究機関 | 大阪大学 |
|---|
研究代表者 |
佐古田 三郎 大阪大学, 医学部, 助手 (00178625)
|
|---|
| 研究分担者 |
辻野 精一 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 (70280790)
水野 隆三 大阪大学, 医学部附属病院, 医員
鈴木 友和 九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (20028517)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1987 – 1988
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1988年度)
|
| 配分額 *注記 |
2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
1988年度: 400千円 (直接経費: 400千円)
1987年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
|
|---|
| キーワード | ホスホグリセレートムターゼ / 骨格筋 / ヒトゲノムDNA / プロモーター / ホスホグリセレートムダーゼ欠損症 / cDNAクローニング / 解糖系酵素 |
|---|
| 研究概要 |
ホスホグリセレートムターゼ(PGAM)欠損症解析の第一歩として正常の、PGAMM(筋型)のgenomic cloringに着手した。PGAM-M cDNAをプローブとしたgenomic Southern lilotで強くハイブリダイズする2本のバンドを基に2種類のenirichl genomic libraryを作製した。それらのlibraryよりλPGAMM4.11(〜2.8Kb)とλPGAMM5.11(〜4.3Kb)をクローニングした。その後の解析からλPGAMM4.11はPGAMM genomic DNAの5′側をλPGAMM5.11はその3′側を構成し、両者は隣接することが判明した。PGAMM genomic DNAの特徴を述べると、全長2.86Kbで3つのEXONと2つのINTRUNより成り立っていた。この構成は2.3ーbisphosphoglycerate mufase(BPGAM)の構成と似ており、特に2番目のINTRONは全く同じ場所に局在していた。このことは、PGAMとBPGAMがgene familyで同じancestral geneより派生してきたという仮説をさらに支持するものである。TATA boxと逆転したCCAA boxは通常の位置にみられた。他の筋特異的housekeeping geneとそのプロモーター領域を比較検討したところ"GGGGCTGGG"の9ーbPなレメントが、アルトラーゼ筋型、クレアチンキナーゼ筋型、グリセロアルデヒドー3燐酸脱水素酵素の遺伝子の5′上流にも存在していた。不完全ではあるが乳酸脱水素酵素Aにも存在している。この9ーbpエレメントが筋特異的プロモーターか否かはエレメントの変異実験が骨格筋特異的プロモーター活性に及ぼす影響をみなければならない。以下の実験は現在進行中である。1.PGAM-M欠損症の解析(米国コロンビア大D.Mauro教授との共同研究)3つのEXONの両サイドのDNAを合成し、それらをprimerとして患者のgenomicDNAのEXON部分のみをポリメラーゼチェーンリアクション法により増幅し、その遺伝子構造を決定する。2.PGAM-M遺伝子座位の決定(英国MRCエドワード教授との共同研究)PGAMーB(脳型)にハイブリダイズしないPGAM-M INTRON or 5′上流をプローブとしてPGAM-Mの遺伝子座を決定する。
|
