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筋ジストロフィ-症筋の急速凍結・ディ-プエッチング法による細胞膜と細胞骨格の研究

研究課題

研究課題/領域番号 62570370
研究種目

一般研究(C)

配分区分補助金
研究分野 神経内科学
研究機関昭和大学

研究代表者

若山 吉弘  昭和大学, 医学部, 教授 (40138467)

研究分担者 斎藤 進  昭和大学, 医学部, 助教授 (90097725)
研究期間 (年度) 1987 – 1988
研究課題ステータス 完了 (1989年度)
配分額 *注記
1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
1988年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1987年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
キーワードDuchenne nuscular dystrophy / muscle plasma membrane / orthogonal array / regenerating muscle fiber / quick freeze deep etch rotary shadow replica / myofilaments / Qiuck freeze deep etch rotary shadow法 / Freeze fracture法 / Duchenne muscular dystrophy / Orthogonal array / Myosin cross bridge / Distal angle / Dystrophin / 筋ジストロフィー症筋 / 急速凍結ディープエッチ回転蒸着法 / レプリカ膜 / 細胞膜と細胞骨格
研究概要

我々の研究よりDuchenne筋ジストロフィ-症(DMD)の筋細胞膜異常の特徴は膜内粒子の減少特にorthogonal array(OA)の減少であることが判明した。OAは幼若な筋細胞膜には見られず、DMD生検筋細胞膜にみられるOAの減少は本症生検筋に混在する筋細胞変性後の再生筋線維によるものではないかという批判が存在する。この点を解明するため再生筋線維では筋細胞の内部の筋原線維の配列が不規則で細胞内部の様相から再生筋線維であることがわかるので、筋細胞膜と筋細胞の内部とが連続して3次元的に観察可能なquick freeze,deep etching,rotary shadow(QDR)法を用いてDMD筋とヒト正常骨格筋とを対象として筋細胞膜と細胞内部とを同時に観察し、DMD筋では再生筋細胞以外の筋細胞膜でもOAが存在しないことを確認するため本研究を実施した。6例の組織化学的に正常なヒト大腿四頭筋と3例のDMD患者大腿四頭筋を生検後直ちに細切し、液体窒素と液体ヘリウムにて-269℃にまで冷却した純銅ブロックに圧着して急速凍結し、そのごく表面を凍結割断装置で割断しdeep etching後low angleでプラチナとカ-ボンを回転蒸着しレプリカ膜を作製、また一部レプリカ膜はshadow angle 30°で一定方向からプラチナとカ-ボンを蒸着し作製し電顕にて観察、写真を撮影した。一定方向蒸着と回転蒸着レプリカ膜とも生の生検骨格筋細胞膜のとくにP面、(protoplasmic face)ではOAを観察することは困難であった。しかしグリセロ-ルに浸軟してない生の骨格筋標本のこのようなレプリカ膜にはdeep etchingがよく効き、筋原線維の微細構造がはっきりと観察可能であった。従って筋細胞膜のOAなどの微細構造は従来のfreeze fracture法の方がはっきり認識できることが判明したが、QDR法は細胞骨格の研究には極めてすぐれていることも判明した。

報告書

(3件)
  • 1989 研究成果報告書概要
  • 1988 実績報告書
  • 1987 実績報告書
  • 研究成果

    (5件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (5件)

  • [文献書誌] Wakayama,Y.and Shibuya,S.: "Observation of muscle plasma membrane associated cytoskeleton by quick freeze,deep etch,rotary shadow replica method(abstract)" Journal of Neuropathology and Experimental Neurology.

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Wakayama,Y.and Shibuya,S.: "Obsevation of muscle plasma membrane associated cytoskeleton of mdn mice by quick freeze,deep etch,rotary shadow replica method" Acta Neuropathologica.

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Wakayama, Y. and Shibuya, S.: "Observation of muscle plasma membrane associated cytoskeleton by quick freeze, deep etch, rotary shadow replica method (Abstract)." Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Wakayama, Y. and Shibuya, S.: "Observation of muscle plasma membrane associated cytoskeleton of mdx mice by quick freeze, deep etch, rotary shadow replica method (Full paper)." Acta Neuropathologica.

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 若山吉弘・渋谷誠二: 厚生省「精神・神経疾患研究委託費」筋ジストロフィー症及び関連疾患の病態とその病因に関する研究昭和63年度研究報告書.

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書

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公開日: 1987-04-01   更新日: 2016-04-21  

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