ヒト悪性glioma細胞株(TM-1)における自己増殖促進物質の分離と精製

• 研究課題/領域番号: 62570650
• 研究種目: 一般研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 脳神経外科学
• 研究機関: 富山医科薬科大学
• 研究代表者: 岡 伸夫 富山医科薬科大学, 附属病院, 講師 (10135006)
• 研究分担者: 新井 研治 富山医科薬科大学, 附属病院, 助手 (90159476) ; 野上 予人 富山医科薬科大学, 医学部, 助手 (90208306) ; 栗本 昌紀 富山医科薬科大学, 附属病院, 助手 (10161770) ; 山谷 和正 富山医科薬科大学, 附属病院, 助手 ; 中田 潤一 富山医科薬科大学, 医学部, 助手 (50143855)
• 研究期間 (年度): 1987 – 1989
• 研究課題ステータス: 完了 (1989年度)
• 配分額: 2,400千円 (直接経費: 2,400千円); 1989年度: 500千円 (直接経費: 500千円); 1988年度: 600千円 (直接経費: 600千円); 1987年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
• キーワード: 悪性神経膠腫 / 細胞成長因子 / 組織培養 / 自己分泌作用 / 細胞株 / 悪性グリオーマ / 細胞増殖因子

研究概要

〔目的〕ヒト悪性glioma細胞株(TM-1)の培養上清液には、TM-1、ヒトfibroblast(Fbts)、ラットgliaの増殖を促進する物質が含まれており、その分析を行った。
〔方法・結果〕1.TM-1を無血清培地(SF-M)で培養し、その上清液を超遠心した。1%酢酸で透析後凍結乾燥し、1M酢酸可溶画分(FDAA)を得、更にBio-Gel P60にてゲル濾過し分画した。(1)FDAA添加SF-MでのTM-1の培養は、SF-M時と比し細胞数の増加は明かで、10日目には約3倍に達した。(2)TM-1やFbtsの[^3H]-TdRの取り込みは、FDAAの添加量の増加に伴い増加した。(3)TMー1の[^3H]TdRの取り込みは、4-11kDaの各分画を添加することにより増加した。一方、Fbtsでは7.5-10kDa,15kDa,24-30kDaの各分画で増加した。(4)NRK49F細胞の軟寒天培地中でのコロニ-形成は、5-10kDaと30kDa付近の分画の添加により促進した。(5)Dot blotting法を用いた検討で、抗PDGF抗体は反応する物質はvoid volumeと30kDa付近の分画に、抗TGFα抗体と反応する物質は6.5-7.5kDaの各分画に存在した。2.FDAAと7.5kDa、30kDa付近の分画のboiling,DTT,trypsin処理は、TM-1の[^3H]Tdrの取り込みをSF-M時と同程度まで低下させた。3.StreptABC法を用いた検討で、TM-1はEGF-receptorを有していた。
〔結論〕TM-1培養上清液中には、分子量4-11万のautocrine型の自己増殖促進作用とFbtsの増殖促進作用を示す物質が存在する。さらにTGFs類似のコロニ-形成促進活性や、抗PDGF抗体、抗TGFα抗体と反応する物質も検出された。しかし、その増殖促進活性は熱に不安定であり、既に知られているPDGFやTGFαの性状と異なっていた。またTM-1におけるEGF-receptorの存在は、TM-1に対するEGFやTGFαの作用を間接的に裏ずけるものであった。