| 研究課題/領域番号 |
62570989
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
生物系薬学
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
綿矢 有佑 岡山大学, 薬学部, 助教授 (90127598)
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| 研究分担者 |
根岸 和男 岡山大学, 薬学部, 助手 (70116490)
速津 彦哉 岡山大学, 薬学部, 教授 (10012593)
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| 研究期間 (年度) |
1987 – 1988
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| 研究課題ステータス |
完了 (1988年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1988年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1987年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
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| キーワード | ヌクレオチド代謝 / デオキシヌクレオシド三リン酸プールの不均衡 / 細胞死 / FM3A細胞 / DNA二本鐙切断 / パルスフィールドゲル電気泳動 / dNTP不均衡死 / デオキシヌクレオシドミリン酸プールの不均衡 / FM3A細胞DNA二本鎖切断 / ヌクレオシド / デオキシヌクレオシドミリン酸 / プールの不均衡 / dNTP Imbalamce Deathi / 制がん剤 / 細胞死の機構 / 5-フルオロウラシル / 代謝拮抗剤 |
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| 研究概要 |
1.種々のヌクレオシド類(5ーフルオロデオキシウリジン(FdUR),デオキシアデノシン,zークロロデオキシアデノシン,トリフルオロメチルデオキシウリジン等)を細胞に投与して細胞内デオキシヌクレオシド三リン酸(dNTP;dATP,dGTP,dCTP及びdTTP)プールの不均衡を誘導すると、この不均衡に起因すると考えられる細胞死(dNTP imbalance death)が起こった。それぞれの化合物で生じたdNTPプールの不均衡パターンは異なっていたにもかかわらず、生じたDNA断片をorthogonal-field alternation gel electrophoresis(OFAGE)で調べると100ー200Kbpと同じ大きさであった。このことは、このDNA二本鎖切断が細胞死の直接の原因であることを示唆している。
2.マウスFM3A細胞にFdURを投与し、20時間後の細胞を集めて超音波で破壊した後10万gで遠心した上清をlysateとした。これをDEAE-agaroseカラムクロマトグラフィーで分画したところ5mM Naclの塩濃度で溶出される画分にintactなFM3A細胞のDNAを切断するヌクレアーゼ活性が検出できた。
3.2.と同様にlysateを分画するとNaclを含まない画分に2.のヌクレアーゼ活性を阻害するfactorがあることがわかった。
4.FM3A細胞にFdVRを投与した後、OFAGEでDNAを分離し、100ー200KbpのDNA断片の部位を切りとり、ゲルごと5末端を^<32>Pでラベルした後DNAを抽出して5末端の塩基配列を解析したところ、ピリミジン塩基であることがわかった。このことはDNAが特異的な部位で切断されていることを示している。
以上述べた研究結果によってdNTP imbalance deathが起こる時には特異的な部位でDNA二本鎖切断を起こすヌクレアーゼが誘導され、細胞に致死的に働いていること、及び、その阻害物質が細胞内に共存してヌクレアーゼとの相互作用によってDNA二本鎖切断、ひいては細胞の生死をも制御していることが示唆された。
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