| 研究課題/領域番号 |
62580118
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
物質生物化学
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
船越 育雄 京都大学, 薬学部, 助手 (10025702)
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| 研究分担者 |
菅原 一幸 京都大学, 薬学部, 助手 (60154449)
山科 郁男 京都大学, 薬学部, 名誉教授 (70025675)
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| 研究期間 (年度) |
1987 – 1988
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| 研究課題ステータス |
完了 (1988年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1988年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1987年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
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| キーワード | 単クローン抗体 / 糖鎖特異的単クローン抗体 / 癌関連抗原 / ムチン型糖タンパク質 / ムチン / 抗原糖鎖構造 / Oーグリコシド型糖鎖 / LS180 / ムチン型糖鎖 / 結腸癌細胞 / SW1118 |
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| 研究概要 |
本研究では、まず、ヒト結腸癌細胞LS180またはSW1116を抗原としてマウスを免疫することにより、多数の糖鎖特異的単クローン抗体を作成した。この抗体の一つであるMLS102は結腸癌細胞や癌細胞が分必するムチンとは反応するが正常の結腸組織とは極く弱くしか反応しなかった。MLS102が認識する抗原構造は顎下腺ムチンや合成オリゴ糖を用いた研究から、NeuAcα2→6GalNAcがポリペプチド鎖に密集して結合したものであることが明らかとなった。そこで次に、LS180細胞のMLS102抗原の構造を明らかにするために、LS180細胞、および、その培養液から抗原糖タンパク質を分離、精製した。この時、癌細胞、正常結腸組織のいずれともよく反応するMLS103抗体についても、その抗原をLS180細胞から分離し、MLS102抗原と比較した。抗体カラムを用いて精製されたMLS102抗原はSer,Thr,Rroを異常に多く含む糖タンパク質で、糖鎖はNeuAcα2→6GalNAcが56%、GalNAcが25%を占めていた。これに対しMLS103抗原はアミノ酸組成も、糖鎖の構造もMLS102抗原とは明らかに異なっていた。
SW1116細胞を用いて作成した抗体であるMSW113は膵臓癌患者血清中の癌関連抗原の検出に極めて有用な抗体である。本抗体はヒト初乳中のオリゴ糖とも反応したので、このオリゴ糖を単離し、その構造を決めることにより、本抗体の認識する抗原糖鎖構造を明らかにした。オリゴ糖の構造は500MHzの^3H-NMRによる解析からシアリルーLe^aオリゴ糖と決定された。この糖鎖をエピトープとする抗体としてはNS19ー9が既に知られているが、シアリルーLe^a構造をもった数種の糖鎖に対しては、いずれもMSW113のほうが強く反応した。これ等の結果は、MSW113がシアル酸側からシアリルーLe^a抗原を認識しているのに対し、NS19ー9はフコース側からこの同一抗原を認識していることを示すものと考えられる。
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