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大腸菌のγ-グルタミルトランスペプチダ-ゼに関する研究

研究課題

研究課題/領域番号 63560102
研究種目

一般研究(C)

配分区分補助金
研究分野 応用微生物学・発酵学
研究機関京都大学

研究代表者

熊谷 英彦  京都大学, 農学部, 助教授 (70027192)

研究分担者 矢野 俊博  京都大学, 農学部, 教務職員 (30135553)
山本 憲二  京都大学, 農学部, 助手 (70109049)
研究期間 (年度) 1988 – 1989
研究課題ステータス 完了 (1989年度)
配分額 *注記
1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
1989年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1988年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
キーワードγ-グルタミルトランスペプチダ-ゼ / γ-グルタミルトランスペプチダ-ゼ遺伝子 / 大腸菌 / γ-グルタミル化合物 / グルタチオン / γーグルタミルトランスペプチダーゼ / γーグルタミルトランスペプチダーゼ遺伝子 / 塩基配列 / γーグルタミル化合物
研究概要

1.大腸菌のγ-グルタミルトランスペプチダ-ゼ(GGT)をコ-ドする遺伝子ggtについて、M13ジデオキシ法により全塩基配列を決定した。この結果、本遺伝子は、シグナルペプチド(25アミノ酸残基)大サブユニット(365)、小サブユニット(190)をひとつのオ-プンリ-ディングフレ-ム中にコ-ドすることが明らかになった。このような知見は、大腸菌GGTが哺乳動物のそれと同様、一本のポリペプチド鎖として合成された後にプロセッシングを受けることを示唆する。アミノ酸配列の相同性を、ラット腎、ヒト肝GGTについて検索したところ、同一アミノ酸の使用頻度は、30数%であり、それ以外の部分もコンサ-バティブな置換であることが観察され、これらGGTが互いによく似た構造をとることが推測された。
2.GGTの高生産株SH642から二段階で迅速大量にGGTを精製する方法を種々検討し相当量のGGT精製標品を得た。
3.精製したGGTを使用してS-ベンジルグルタチオン、またチロシン、ヒスチジンのγ-グルタミル化合物の酸素合成を行い、それぞれ、31.2g/L、35.7g/Lおよび41.2g/Lの収量を得た。
4.ggtの構造遺伝子部分を高発現ベクタ-pKK223-3に組み込むことを二段階のクロ-ニングにより試みた。先ずggtのEcoRV断片(主として大サブユニット部分をコ-ドする)をpKK223-3に組み込む。ついで、この大サブユニット部分が組み込まれたプラスミドに、ggtのHpaI-PstI断片(小サブユニットをコ-ドする)を組み込む。現在第一段階まで成功している。
5.小サブユニット中のセリン75をアラニンまたは、システインと置換する変異をggtに導入した。変異型酵素の基質特異性、熱安定性等について検討中である。

報告書

(3件)
  • 1989 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1988 実績報告書
  • 研究成果

    (24件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (24件)

  • [文献書誌] Hideyuki Suzuki: "Molecular cloning of Escherichia coli K-2 ggt and rapid isolation of γ-glutamyltranspeptidase" Biochem.Biophys.Res.Commun.150. 33-38 (1988)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hidehiko Kumagai: "Synthesis of γ-glutamyl-DOPA from L-glutamine and L-DOPA by γ-glutamyltranspeptidase of Escherichia coli K-12" Agric.Biol.Chem.52. 1741-1745 (1988)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 熊谷英彦: "細菌のγ-グルタミルトランスペプチタ-ゼ" 蛋白質、核酸、酵素. 33. 1545-1550 (1988)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hidehiko Kumagai: "Unilization of the γ-glutamyltranspeptidase reaction for glutathione synthesis" J.Biotechnol.9. 129-138 (1989)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hidehiko Kumagai: "Enzymatic synthesis of γ-glutamyl-tyrosine methyl ester from L-glutamine and L-tyrosine methyl ester with Escherichia coli K-12 γ-glutamyltranspeptidase" Agric.Biol.Chem.53. 1429-1430 (1989)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hidehiko Kumagai: "Enzymatic synthesis of γ-glutamyl-L-histidine by γ-glutamyltranspeptidase from Escherichia coli K-12" Lett.Appl.Microbiol.8. 143-146 (1989)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 鈴木秀之: "Escherichia coli K-12のγ-グルタミルトランスペプチダ-ゼ" 生化学. 61. 491-496 (1989)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hideyuki Suzuki: "DNA sequence of the Escherichia coli K-12 γ-glutamyltranspeptidase gene,ggt" J.Bacteriol.171. 5169-5172 (1989)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hidehiko Kumagai: "Escherichia coli K-12 mutants lacking γ-glutamyltranspeptidase and Molecular cloning of ggt gene,in Glutatione Centennial:Molecular Perspectives and Clinical Implications" ed.by N.Taniguchi,T.Higashi,Y.Sakamoto and A.Meister,Academic Press,161-175 (1988)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1989 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hidehiko Kumagai: "Utilization of the γ-glutamyltranspeptidase reaction for glutathione synthesis" J.Biotechnol.9. 129-138 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Hidehiko Kumagai: "Enzymatic systhesis of γ-glutamyl-tyrosine methyl ester from L-glutamine and L-tyrosine methyl ester with Escherichia coli K-12 γ-glutamyltranspeptidase" Agric.Biol.Chem.53. 1429-1430 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Hidehiko Kumagai: "Enzymatic systhesis of γ-glutamyl-L-histidine by γ-glutamyltranspeptidase from Escherichia coil K-12" Lett.Appl.Microbiol. 8. 143-146 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] 鈴木秀之: "Escherichia coil K-12のγ-グルタミルトランスペプチダ-ゼ" 生化学. 61. 491-496 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Hideyuki Suzuki: "DNA sequence of the Escherichia coli K-12 γ-glutamyltranspeptidase gene,ggt" J.Bacteriol.171. 5169-5172 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Hidehiko Kumagai: "Escherichia coli K-12 mutants lacking γ-glutamyltranspeptidase and Molecular cloning of ggt gene,in Glutathione Centennial:Molecular Perspectives and Clinical Implications" ed.by N.Taniguchi,T.Higashi,Y.Sakamoto and A.Meister,Academic Press,pp.161-175 (1989)

    • 関連する報告書
      1989 実績報告書
  • [文献書誌] Hideyuki Suzuki: Biochem.Biophys.Res.Commun.150. 33-38 (1988)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] Hidehiko Kumagai: Agric.Biol.Chem.52. 1741-1745 (1988)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] 熊谷英彦: 蛋白質・核酸・酵素. 33. 1545-1550 (1988)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] Hidehiko Kumagai: J.Baiotechnol.(1988)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] Hidehiko Kumagai.: Agric.Biol.Chem.53. (1989)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] Hidehiko Kumagai: Lett.Appl.Microbiol.(1989)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] 鈴木秀之: 生化学. (1989)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] Hideyuki Suzuki: J.Bacteriol.

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書
  • [文献書誌] Hidehiko Kumagai: "Glutathione Centinnial:Molecular Perspectives and Clinical Implications" Academic Press Inc., (1989)

    • 関連する報告書
      1988 実績報告書

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公開日: 1988-04-01   更新日: 2016-04-21  

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