| 研究課題/領域番号 |
63570554
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
内分泌・代謝学
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| 研究機関 | 兵庫医科大学 |
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研究代表者 |
山本 徹也 兵庫医科大学, 医学部, 講師 (60104246)
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| 研究期間 (年度) |
1988
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| 研究課題ステータス |
完了 (1988年度)
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| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1988年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
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| キーワード | HuH-7 cell / apo B-containing lipoprotein / apo A-I-containing lipoprotein / apo B-100 / apo A-I |
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| 研究概要 |
Human hepatoma cell line(HuH-7)のmedium中に分泌されるlipoproteinのlipidはd.<1.063g/ml fraction3.5%、d.1.063〜1.210g/ml fraction 70.9%、d>1.210g/ml fraction 23.6%の分布を示した。またapolipoproteinA-I(apoA-I)、A-II(apoA-II)、B(apoB)及びE(apoE)の各々も各fractionすべてに認められた。それ故ヒト血漿のように超遠心による分画では数種のlipoproteinが混在しているため、我々はaffinity columnを用いて特にapoB及びapoA-I-containing lipoproteinを精製し、その性状を検討した。以前報告した結果に加えてapoB-containing lipoproteinはSDS-PAGE及びimmunoblbotによりapo B-100を所有していることが明らかになった。またこのlipoproteinはagar gel electrophoresisにて一部anode側に泳動されたが、agar gel electrophoresisにてanode側に泳動されるlipoproteinX及びYとは明らかにその性状は異なっていた。このlipoproteinは血漿LDLと同様ConcanavalinAと反応するが血漿LDLとは異なってRicinus communis agglutininとは反応しなかった。このことは少なくともapo B-containing lipoproteinの表面に存在するcarbohydrateはD-galactoseを含んだsugar chainが無いか非常に少ないことを示唆しているものと思われた。一方apo A-I-containing lipoproteinはagarose gel electrophoresisにてα-lipoproteinより遅く泳動されmain bandはpre betaの位置に認められた。このlipoproteinはprotein/lipid比が約4.8でfree cholesterol、triglyceride及びphospholipidを所有していたがcholesteryl esterは明らかではなかった。またこのlipoproteinのapo A-Iは12.5%、SDS-PAGE及びそのimmunoblotにて血漿HDLのapo A-Iと同じ移動度を示した。Isoelectric focusing gel electrophoresis及びそのimmunoblotでもapo A-I_4、apo A-I_5、apo A-I_6が認められた。Hep G-2のmedium中ではapo A-I_2及びapo A-I_3のみの存在が認められているため、HuH-7のmedinm中にapo A-I_2のNH_2-terminal hexo-peptideを切断するproteaseが存在しているものと思われた。
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