| 研究課題/領域番号 |
63571098
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
応用薬理学・医療系薬学
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
西尾 廣昭 広島大学, 医学部, 助教授 (30034036)
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| 研究期間 (年度) |
1988 – 1989
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| 研究課題ステータス |
完了 (1989年度)
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| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1989年度: 400千円 (直接経費: 400千円)
1988年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
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| キーワード | 血小板 / 立体微細構造 / 超高圧合子顕微鏡 / 凍結断燥法 / 臨界点断燥法 / 超高圧電子顕微鏡 / 凍結乾燥法 / 臨界点乾燥法 / 超電圧電子顕微鏡 |
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| 研究概要 |
超高圧電子顕微鏡による血小板立体微細構造の観察には、主に臨界点乾燥法による試料作成法を用いて行ってきたが、その実験結果には再現性などに若干の問題があった。本研究では、試料の変選が少なく、再現性に優れていると言われている凍結乾燥法を適用するため、組織凍結乾燥装置を購入しその試料作成法の検討を行った。本装置は主に固定組織用に開発されたもので、血小板のような微細遊離細胞を試料とする場合には、何等かの特別な装置を開発する必要があったが、poly-L-lysine処理したpolyvinylformalを支持膜とするシ-トメッシュを用い特製ホルダ-にセットする事により解決した。予備固定した血小板をメッシュに付着させ、シ-トメッシュ上でさらに固定、染定をほどこした。試料の液体窒素による急速凍結にも、特製ホルダ-を作成した。乾燥後、カ-ボン蒸着を行い、超高圧電子顕微鏡による観察を行った。その結果、本試料作成法は、臨界点乾燥法のように有機溶媒、液化炭酸ガスによる置換操作がないため、コンタミによる汚染が少なく再現性のある試料作成が可能となった。この方法を用いて得られたものと、従来の超薄切片法によって認められる微細構造との比較検討を行った。その結果、セロトニン貯蔵部位であるとされる濃染顆粒がより明瞭に観察され、周辺部微小管系も同定可能であった。α-顆粒やミトコンドリアも認められたが、標準固定染色法ではその特徴的構造は不明瞭であった。一方、グリコ-ゲン顆粒は同定不可能であった。さらに、細胞内小管系、開放小管系はステレオペア-像による三次元的観察により、それらの立体的関係が解析可能であった。さらに、各種薬理学的修飾の影響についても検討を行った。なお、超高圧電子顕微鏡(H-1250M)による観察は、岡崎国立共同研究機構生理学研究所の共同利用実験によって行った。
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