| 研究課題/領域番号 |
63571104
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
病態検査学
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
三田村 健 北海道大学, 医学部, 助教授 (10109449)
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| 研究分担者 |
千葉 仁志 北海道大学, 医学部, 助手 (70197622)
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| 研究期間 (年度) |
1988 – 1989
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| 研究課題ステータス |
完了 (1990年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1989年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1988年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
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| キーワード | アポリポ蛋白 / 酵素免疫測定法 |
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| 研究概要 |
血清リポ蛋白の過酸化で生ずる過酸化脂質の分解産物によって修飾された(変性)リポ蛋白の酵素免疫測定法を開発するに先立ち、試料血清(リポ蛋白)の前処理について検討し、ラット・アポEとアポAーIの酵素免疫測定法を開発した。
1)ラット・アポEのサンドイッチ酵素免疫測定法の開発:アポEを精製し、それを兎に免疫した抗血清を得た。希釈した検体試料および標準物質を、精製したIgGで予めコ-ティングしたマイクロタイタ-・プレ-トに加えてインキュベ-トした。洗浄後、精製したFab'ー西洋ワサビ・ペルオキシダ-ゼ抱合体を加えてインキュベ-トし、結合した酵素を比色法によって測定した。試料および標準物質を6M塩酸グアニジンで前処理した時にアポEの抗原反応は最大となった。測定感度はアポEおよそ1 pg、作業測定範囲は0.1〜1.0ngであった。測定内および測定間変動係数は、それぞれ平均1.8%と4.1%であった。血清アポE濃度(平均値±標準偏差)は、若齢(8ー12週齢、9匹)で21.2± 2.1mg/dl、老齢(36ー40週齢、16匹)で61.3±17.0mg/dlであった。ゲル滬過で調べたところ、絶食時の血清アポEはほとんどが大きなHDL粒子(HDL_1)に結合しており、遊離型で存在するものは僅かであった。
2)アポAーIのサンドイッチ酵素免疫測定法の開発:血清を6M塩酸グアニジンで前処理することによりアポAーIのエピト-プの露出は最大となった。測定内および測定間変動係数は、それぞれ平均2.8%と4.1%であった。老齢ラット(36ー40週齢、16匹)の血清アポAーI濃度(平均値±標準偏差)は62.3±8.6mg/dlで、若齢(8ー12週齢、9匹)それ(55.1±4.3mg/dl)よりも有意に(p〈0.05)高値であった。
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