| 研究課題/領域番号 |
63580156
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
代謝生物化学
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| 研究機関 | 長崎大学 |
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研究代表者 |
小池 正彦 長崎大学, 医学部, 教授 (10039521)
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| 研究分担者 |
浦田 芳重 長崎大学, 医学部, 助手 (30185087)
小池 吉子 長崎大学, 医学部, 助教授 (80039619)
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| 研究期間 (年度) |
1988 – 1989
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| 研究課題ステータス |
完了 (1989年度)
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| 配分額 *注記 |
1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
1989年度: 400千円 (直接経費: 400千円)
1988年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
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| キーワード | ピルビン酸脱水素酵素 / ヒト / 遺伝子 / 生合成 / 構造形成 / 機能発現 / PDHbeta gene / nucleotide sequences |
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| 研究概要 |
生細胞ミトコンドリア(Mt)の主要呼吸燃料であるピルビン酸の酸化的脱炭酸分解反応を触媒するピルビン酸脱水素酵素複合体を構成する3種類の成分酵素は、核DNAにコ-ドされた全駆体としてサイトゾ-ルで生合成された後、Mtに輸送され、プロセッシングをうけ、活性発現しているものと推定されている。本研究は、複合体の第一成分でTTPを補酵素とし、α_2β_2サブユニット(鎖)構造をもつピルビン酸脱水素酵素(PDH)を中心に全容解明を意図した。
(1)クロ-ニング・塩基配列決定を行ったヒトPDHα、β鎖cDNAを、発現ベクタ-pTZ18Rに組み込み、in vitro転写反応系を用いてα、β両mRNAを調製し、HeLa細胞両mRNAとα、β両cDNAをプロ-ブとして大きさを比較したがよく一致していた。また、合成mRNAの転写物はHeLa細胞mRNAがin vitro合成系中で産生するα、β前駆体と類似の大きさのポリペプチドを生成することも判明した。
(2)ヒトPDHα鎖遺伝子-α鎖cDNAをプロ-ブとし、ヒト白血球ゲノムライブラリ-から全長17kbに及ぶ2個のクロ-ンを得、全塩基配列を決定した。本遺伝子は11のエクソンからなり、イントロン/エクソン境界は全てGT/AG則に従っていた。我々の包皮線維芽細胞由来cDNAは他のライブラリ-からクロ-ンされたcDNAと比べ93bpが欠失していたが、この93bpは本遺伝子のエクソン6として存在していることが明らかとなった。転写開始点は翻訳開始点より124bp上流のチミンと推定した。
(3)ヒトPDHβ鎖遺伝子-18kbの1個のクロ-ンを単離し、その全塩基配列を決定した。本遺伝子は10のエクソンからなり、転写開始点は翻訳開始点より132bp上流のアデニンと推定し、その他のプロモ-タ-領域の構造をも明らかにした。
今後得られた結果を基に各遺伝子の発現機構を明らかにしたい。
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