| 研究課題/領域番号 |
63580168
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
放射線生物学
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| 研究機関 | 日本大学 |
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研究代表者 |
井上 正 日本大学, 農獣医学部, 助教授 (90124213)
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| 研究期間 (年度) |
1988 – 1989
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| 研究課題ステータス |
完了 (1989年度)
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| 配分額 *注記 |
1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
1989年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1988年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
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| キーワード | 突然変異 / マウス / ラムダファ-ジ / 検出系 / 試験管内パッケージ |
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| 研究概要 |
哺乳動物個体レベルで遺伝子突然変異を検出しうる系の開発を目指し、以下のごとき、微生物遺伝学的手法と、哺乳動物初期胚操作を組み合わせた実験を行なった。
大腸菌supF遺伝子はトランスファ-RNAの構造遺伝子でありamber変異をサプレスするが、この遺伝子をプラスミドpBR322に組込みさらにこれをラムダファ-ジEMBL3に導入し多くの組換え体を得、これらの制限酵素地図を作成するとともに、試験管内パッケ-ジの効率の高いものを選択した。組換えファ-ジのsupF遺伝子に生じた突然変異は、適当な大腸菌指示菌(lacZam)を用いてプラ-クの色の変化として、容易に検出でき、さらに、変異部分の塩基配列も簡単に決定できる。実際、このファ-ジを、紫外線照射した大腸菌内で増殖させると、線量に依存して突然変異頻度が増加し、突然変異株の塩基配列を決定できた。上記組換えファ-ジDNAをマウス授精卵に導入し、ラムダに含まれるsupFをトランスジ-ンとして保有するマウス系統をサザン法により選択した。そのDNAを試験管内パッケ-ジすることにより、マウス細胞で生じたsupFの変化を大腸菌を用いて検出/定量することをこころみた。現在数系統のトランスジェニックマウスを作出し、それらより得たDNAにつき、パッケ-ジの効率や、塩基置換の頻度などに関して、解析を行なっている。
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