| 研究領域 | 生物合成系の再設計による複雑骨格機能分子の革新的創成科学 |
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| 研究課題/領域番号 |
17H05432
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| 研究種目 |
新学術領域研究(研究領域提案型)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 審査区分 |
理工系
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
勝山 陽平 東京大学, 大学院農学生命科学研究科(農学部), 准教授 (50646437)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2019-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2018年度)
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| 配分額 *注記 |
7,800千円 (直接経費: 6,000千円、間接経費: 1,800千円)
2018年度: 3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円)
2017年度: 3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円)
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| キーワード | 非リボソームペプチド合成酵素 / ヘテロ環化 / X線結晶構造解析 / nonribosomal peptide / biosynthesis / secondary metabolite / 放線菌 / 天然物 / 非リボソームペプチド / JBIR-34 |
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| 研究実績の概要 |
昨年度に引き続きFmoA3のX線結晶構造解析に取り組んだ。昨年度、apo型、AMP-PNP結合型、alpha-mehtylseryl-AMP結合型、3つの状態の構造解析に成功していたため、次に中間体である、ジペプチドが結合したFmoA3のX線結晶構造解析を試みることにした。昨年度合成したジペプチド中間体アナログが結合したFmoA3の合成を酵素方により試みた。その結果、この反応の過程で、FmoA3の安定性が低下し、凝集することがわかった。反応条件を複数検討したが、現在のところ、安定なジペプチド中間体アナログが結合したFmoA3の生産条件を見つけることができなかった。今後さらなる条件検討を行う予定である。
次にJBIR-126の生合成酵素であるPgpA2, A3とJBIR-34, -35の生合成酵素であるFmoA2, A3間の相互作用に関する解析を行った。ビアコアを用いてPgpA2-PgpA3間とPgpA2-FmoA3間の相互作用の強さを比較したところ、これらのKDはそれぞれ26 μM, 52 μM程度であり、期待したほど大きな違いがないことがわかった。次にPgpA2-FmoA3間、FmoA2-PgpA3間では反応が進行しない原因を探るためにドメイン置換実験を行った。その結果、CPドメインがこれらの反応が進行しない原因の一つであることが明らかになった。おそらくCPドメインと触媒 (Cy) ドメイン間の相互作用の差が反応性に重要であることが示唆された。一方、CPドメイン自体は2酵素間の相互作用には重要ではないことがビアコアを用いた解析によりわかった。
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| 現在までの達成度 (段落) |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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