公募研究
新学術領域研究(研究領域提案型)
外来遺伝子発現を長期間持続できる低細胞毒性型の伝播能欠損型狂犬病ウイルス(RV)ベクターを開発することにより、特定の神経回路のみの神経活動計測・操作をげっし類および霊長類で実現することを目的とする。具体的には、これまで独自に開発してきた、逆行性感染能と外来遺伝子の発現能が高くかつ毒性低いCVS株由来のRVベクターに改変を加え、長期間外来遺伝子発現を持続できる低細胞毒性型の伝播能欠損型RVベクターを開発する。次いで同ベクターの活動計測・操作ベクターとしての性能評価を行なうと共に、特定ニューロン種からの単シナプス性感染伝播を惹起させる系を構築する。
本研究は、外来遺伝子発現を長期間持続できる低細胞毒性型の伝播能欠損型狂犬病ウイルス(RV)ベクターを開発することにより、特定の神経回路のみの神経活動計測・操作をげっし類および霊長類で実現することを目的とする。今年度は、昨年度に開発した一ヶ月程度の外来遺伝子発現を実現する低細胞毒性型・伝播能欠損型RVベクターを更に改変したベクターを作製した。同ベクターはin vitroで複製速度の減弱が見られたため、このベクターをラットに注入し、生存期間を振って還流固定を行ない、組織学的解析によりin vivoでの発現量、発現期間、細胞毒性などを検証したところ、開発したベクターでは2-3ヶ月の外来遺伝子発現を実現し、かつ逆向性感染効率・外来遺伝子発現量も十分であることが示された。この結果を受け、カルシウムイメージングプローブXCaMP-G, XCaMP-Rを発現する低細胞毒性型・伝播能欠損型RVベクター(新型)の回収を試み、これに成功した。また、特定細胞種への投射細胞選択的な細胞活動イメージングを実現するため、EnvXシュードタイピングベクターと、Creリコンビナーゼ存在下でTVXとRVGを発現するアデノ随伴ウイルスベクターの構築と回収を行なった。今後これらのベクターをラットに注入してin vivoでの発現量とイメージング効率およびイメージング可能期間、細胞毒性などを検証し、最終的に数ヶ月以上生理機能解析を可能とする低細胞毒性型・伝播能欠損型RVベクターシステムを確立する。
令和3年度が最終年度であるため、記入しない。
すべて 2022 2021 2020 2019 その他
すべて 雑誌論文 (21件) (うち国際共著 7件、 査読あり 21件、 オープンアクセス 18件) 学会発表 (24件) (うち国際学会 4件、 招待講演 1件) 図書 (2件) 備考 (2件)
Frontiers in Neuroanatomy
巻: 16 ページ: 1-22
10.3389/fnana.2022.809446
The Journal of Neuroscience
巻: 42 号: 12 ページ: 2552-2561
10.1523/jneurosci.1657-21.2021
Science Advances
巻: 8 号: 11
10.1126/sciadv.abi6375
The Journal of Physiology
巻: 600 号: 7 ページ: 1731-1752
10.1113/jp282429
J Neurochemistry
巻: 161(2) 号: 2 ページ: 129-145
10.1111/jnc.15600
Cerebral Cortex
巻: - 号: 3 ページ: 1-21
10.1093/cercor/bhac109
巻: 7 号: 26 ページ: 1-9
10.1126/sciadv.abg4246
120007089253
Viruses
巻: 13(7) 号: 7 ページ: 1387-1387
10.3390/v13071387
Scientific Reports
巻: 11 号: 1 ページ: 17021-17021
10.1038/s41598-021-96532-z
eLife
巻: 10 ページ: 61248-61248
10.7554/elife.61248
iScience
巻: 24(9) 号: 9 ページ: 103066-103066
10.1016/j.isci.2021.103066
Neuron
巻: 109 号: 20 ページ: 3312-3322
10.1016/j.neuron.2021.08.032
120007166034
Molecular Therapy - Methods & Clinical Development
巻: 23 ページ: 11-22
10.1016/j.omtm.2021.07.009
Frontiers in Neural Circuits
巻: 15 ページ: 790116-790116
10.3389/fncir.2021.790116
Adv Exp Med Biol
巻: 1293 ページ: 345-358
10.1007/978-981-15-8763-4_22
Front Behav Neurosci
巻: 14 ページ: 581154-581154
10.3389/fnbeh.2020.581154
eNeuro
巻: 8 号: 2 ページ: ENEURO.0511-20.2021
10.1523/eneuro.0511-20.2021
Nat Commun
巻: 11 号: 1 ページ: 1876-1876
10.1038/s41467-020-15802-y
巻: 23 号: 6 ページ: 101194-101194
10.1016/j.isci.2020.101194
120007163351
Cerebellum
巻: - 号: 3 ページ: 401-408
10.1007/s12311-020-01108-8
bioRxiv
巻: - ページ: 1157-1167
10.1101/854513
http://www2.ehub.kyoto-u.ac.jp/sections/systems_neuroscience/
http://www.pri.kyoto-u.ac.jp/sections/systems_neuroscience/index.html