| 研究概要 |
植物プラス鎖RNAウイルスであるタバコモザイクウイルス(TMV)は、ゲノム上に130Kおよびそのリードスルー産物である180K複製タンパク質をコードする。130K,180Kタンパク質は翻訳と共役してゲノムRNAと結合し、pre-membrane-targeting complex(PMTC)と呼ばれる複合体を形成し、さらにこれが生体膜に結合して複製複合体を形成する。複製複合体が生体膜上に形成されることは、動植物を宿主とするプラス鎖RNAウイルスに共通した事象であるが、その形成過程は不明のままである。そこで本研究では、TMVのPMTCに着目して複製複合体形成機構を解析した。本年度は、生体膜を除去した脱液胞化タバコプロトプラスト抽出液でTMV RNAを翻訳したあとゲル濾過クロマトグラフィーにかけ、PMTCを精製する方法を確立し、PMTCの性状を調べた。その結果、PMTCに含まれるTMV RNAは翻訳を受けない状態にあること、そして、複製タンパク質は,ヌクレアーゼでRNAを分解してもなお、ネイティブPAGE上で1MDa以上の大きさを示す複合体を形成していることが明らかになった。また、PMTCには特異的な宿主因子が含まれることを期待して探索を行ったが、精製PMTC画分に含まれる宿主タンパク質のパターンに、翻訳反応(複製タンパク質の合成)を行わなかった対照サンプルと差がなく、宿主因子の発見には至らなかった。
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