| 研究領域 | 配偶子インテグリティの構築 |
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| 研究課題/領域番号 |
21H00224
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| 研究種目 |
新学術領域研究(研究領域提案型)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 審査区分 |
生物系
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| 研究機関 | 筑波大学 |
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研究代表者 |
水野 聖哉 筑波大学, 医学医療系, 准教授 (10633141)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2023-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
9,360千円 (直接経費: 7,200千円、間接経費: 2,160千円)
2022年度: 4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円)
2021年度: 4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円)
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| キーワード | 休眠卵母細胞 / 遺伝子改変マウス / 卵母細胞 / 小胞輸送 / 遺伝子欠損マウス |
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| 研究開始時の研究の概要 |
本研究では我々が新たに雌性不妊を示すことを発見した2つの遺伝子欠損マウスを基盤とし、①卵母細胞と顆粒膜細胞間のCrosstalk因子の卵母細胞内輸送経路の特定、②卵母細胞ゲノムインテグリティ機構の究明、③卵母細胞の適切な位置取りの制御系の解明を目指す。
本研究は、我々独自の先行研究を基盤とした研究のため他グループの先行研究がない。そのため未知因子が多数存在すると予想される。そこで、我々が開発した迅速なin vivo機能解析を実行する。
本研究は原発性卵巣機能不全や早発閉経などの疾患に深く関連するため、本邦で現在問題となっている出産の高年齢化に伴う不妊の原因の一端を解明することに貢献できる。
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| 研究実績の概要 |
休眠卵母細胞の覚醒や排卵に向けた成長は、卵母細胞とその周囲に存在する顆粒膜細胞とのCrosstalkにより制御されている。我々は、卵母細胞と顆粒膜細胞のCrosstalkに欠かせない因子の輸送制御因子を新たに同定した。そこで、この因子が関わる詳細な分子メカニズムの解明を目指した。
これまでの研究で使用してCreマウスにおいて、標的遺伝子を破壊しない条件でも卵母細胞の成熟や発達に混乱が生じる可能性が新たに明らかとなった。そこで、我々が過去に樹立したB6-Ddx4<em1(CreERT2)Utr>を利用することとした。本マウスではタモキシフェン投与により標的遺伝子破壊が引き起こされるが、出生前にその破壊を誘導する方法は確立していなかった。そこで、過去の文献を参考に、胎齢15日から組換えを生じさせる方法の確立を目指した。胎児期における組換え誘導の有無を出生したマウスで検証した結果、100%の効率で卵母細胞特異的な組換えが生じることが明らかとなった。そこで、この系にて標的遺伝子の卵母細胞特異的な遺伝子破壊実験を行った。
卵母細胞の成熟機構に関与する遺伝子の特定はほとんど進んでいないため、本研究では、迅速は生殖細胞特異的な標的遺伝子破壊実験法の開発にも取り組んだ。我々が新たに開発した改変型ゲノム編集因子を生殖細胞特異的に発現するマウスシステムを構築し、その遺伝子破壊活性を評価した。2つの遺伝子座にて遺伝子破壊実験を行った結果、どちらの遺伝子座にも変異が認めらた。そのうちの一つの遺伝子はその破壊が生殖不全を生じさせることが知られている。そこで、表現型解析を実施した結果、期待通りに生殖不全の表現型を示すマウスを発見することができた。
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| 現在までの達成度 (段落) |
令和4年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
令和4年度が最終年度であるため、記入しない。
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