| 研究領域 | ケモテクノロジーが拓くユビキチンニューフロンティア |
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| 研究課題/領域番号 |
21H00294
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| 研究種目 |
新学術領域研究(研究領域提案型)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 審査区分 |
複合領域
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| 研究機関 | 関西学院大学 |
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研究代表者 |
沖米田 司 関西学院大学, 生命環境学部, 教授 (90398248)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2023-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
7,280千円 (直接経費: 5,600千円、間接経費: 1,680千円)
2022年度: 3,640千円 (直接経費: 2,800千円、間接経費: 840千円)
2021年度: 3,640千円 (直接経費: 2,800千円、間接経費: 840千円)
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| キーワード | ユビキチンリガーゼ / DUB / CFTR / 阻害剤 / RNF185 / RNF5 / RFFL / リガンド |
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| 研究開始時の研究の概要 |
本研究では，嚢胞性線維症(CF)原因タンパク質 CFTR 変異体の分解を促進するユビキチンリガーゼ RFFL, RNF5, RNF185リガンド化合物から特異的阻害剤を同定し，CF患者気道上皮初代培養細胞における有効性評価からCF治療剤の開発を進める．また，網羅的スクリーニングにより同定した CFTR 関連 DUB 相互作用を化合物等で制御し，タンパク質品質管理における E3-DUB 複合体の機能解明と共に，DUBを標的とした新規CF治療法を開発する．
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| 研究実績の概要 |
A1. CF-HBE における RFFL PPI 阻害剤の有効性評価: RFFL PPI 阻害剤 化合物A は CF-HBE においても，CF 治療剤 Orkambi 存在下で CFTR 機能を改善する傾向が観察された．他の CF 治療剤存在下でも，化合物A が治療効果を増強するか否かを評価する予定である．
A2. RNF5/RNF185特異的二重阻害剤の同定: ケミカルアレイスクリーニングにより同定した候補化合物について，SPR 解析，DSF thermal shift assayにより RNF5, RNF185 と結合する化合物を同定した．一部の化合物は，in vitro Ub assay により，E3 リガーゼ活性を高濃度で阻害する可能性が示唆された．
A3. RNF5，RNF185のX線結晶構造解析: RNF185 断片のX線結晶構造解析に成功した．
A4. RNF5-CFTR, RNF185-CFTR相互作用領域の同定: 精製タンパク質を用いた AlphaLISA により，RNF5, RNF185 の細胞質領域と，CFTR-NBD1 が直接的に相互作用することを見出した．今後，NanoBiT 法により，細胞内での結合様式を評価する．
B1. CFTR 関連 DUB リガンドの同定: USP19 断片を用いたケミカルアレイスクリーニングにより，USP19 に結合する化合物候補を得た．今後，SPR 等の二次スクリーニングにより, USP19 リガンド化合物を同定する．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
RFFL-DUB相互作用領域の同定は進展していないが，その他の実験計画は予定通りに進行している．
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| 今後の研究の推進方策 |
USP19 リガンド探索については， USP19 DUB 活性を指標とした化合物スクリーニングや， 人工進化の手法を用いた DNA アプタマーの探索を行い， さらなる効率化を狙う．
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