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抗原受容体遺伝子の対立遺伝子排除による自己形成の分子基盤

公募研究

研究領域免疫系自己-形成・識別とその異常
研究課題/領域番号 22021021
研究種目

特定領域研究

配分区分補助金
審査区分 生物系
研究機関京都大学

研究代表者

縣 保年  京都大学, 医学研究科, 准教授 (60263141)

研究期間 (年度) 2010 – 2012
研究課題ステータス 完了 (2011年度)
配分額 *注記
9,600千円 (直接経費: 9,600千円)
2011年度: 4,800千円 (直接経費: 4,800千円)
2010年度: 4,800千円 (直接経費: 4,800千円)
キーワード遺伝子発現 / エピジェネティクス / 染色体ダイナミクス / クロマチン / E2A転写因子 / 遺伝子再構成 / コヒーシン / CTCF
研究概要

我々は抗原受容体遺伝子再構成に関して研究を行ない、転写因子E2Aが組換え部位に直接結合し、ヒストンアセチル化を上昇させ組換えを誘導することや、片方のアリルで機能的な組換えが成功するとE2Aの抑制因子であるId3が誘導され、E2Aが組換え部位から解離することによってもう片方のアリルの組換えが抑制されることを明らかにした。さらに染色体領域を可視化する3D-FISHによりTCRβ遺伝子座の伸縮状態を解析したところ、染色体上に離れて存在するV領域とDJ領域は、組換えが起きる段階で接近し、組換えが抑制されると離れること,さらにE2Aを過剰発現させると組換えが抑制される段階でも両領域が接近し、組換えが誘導されることを見出した。
染色体のルーヒ.ングに関しては、CTCFや、染色体分配に関わるコヒーシン等の蛋白が関与することが示唆されている。そこでTCRβ遺伝子座におけるこれらの蛋白の結合状態を調べた結果、コヒーシンがE2Aの結合様式とよく相関して、組換えの起きる時期特異的に結合することがわかった。さらに培養細胞を用いてコヒーシンのサブユニットをノックダウンすると、組換えが阻害されることがわかった。そこでコヒーシンのサブユニットSmc3のfloxマウスを、様々な分化段階で欠失可能な各種Creマウスと交配することにより、in vivoでのコヒーシンのT細胞分化と遺伝子再構成における役割を検討している。
一方、より高解像度で染色体構造を解析するために、Chromosome Conformation Capture(3C)アッセイを立ち上げ解析したところ、V領域は組換えが起きる段階でDJ領域と接近し、間に存在するトリプシノゲン遺伝子とは接近しないことから、染色体ルーピングが起きていると考えられた。この3Cアッセイにより、E2Aの過剰発現が染色体ルーピングを誘導できるかさらに検討している。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

E2Aによる染色体ルーピングを媒介する分子機構の解析において、コヒーシンが、E2Aの結合様式とよく相関して、組換えの起きる時期特異的にTCRβ遺伝子に結合することを見出すことができた。さらに培養細胞を用いてコヒーシンのサブユニットをノックダウンすると、組換えが阻害されたことから、さらにin vivoでのコヒーシンのT細胞分化と遺伝子再構成における役割を明らかにするために、コヒーシンのサブユニットSmc3のfloxマウスを、様々な分化段階で欠失可能な各種Creマウスと交配している。

今後の研究の推進方策

染色体構造をより高解像度で解析するために、Chromosome Conformation Capture(3C)アッセイを立ち上げ解析したところ、V領域が組換えの起きる時期特異的に染色体ルーピングにより、DJ領域と接近することを見出した。現在、E2Aの過剰発現が染色体ルーピングを誘導できるかこの方法によりさらに検討しているが、この3Cアッセイには、比較的多数の細胞が必要なため、新たに胸腺細胞特異的E2Aトランスジェニックマウスを作製し、解析を行なっている。

報告書

(2件)
  • 2011 実績報告書
  • 2010 実績報告書
  • 研究成果

    (10件)

すべて 2012 2011 2010

すべて 雑誌論文 (5件) (うち査読あり 5件) 学会発表 (5件)

  • [雑誌論文] Imatinib mesylate directly impairs class switch recombination through downregulation of AID.2012

    • 著者名/発表者名
      Kawamata T, Lu J, Sato T, Tanaka M, Nagaoka H, Agata Y, Toyoshima T, Yokoyama K, Oyaizu N, Nakamura N, Ando K, Tojo A, Kotani A
    • 雑誌名

      Blood

      巻: 119 号: 13 ページ: 3123-3127

    • DOI

      10.1182/blood-2011-01-327932

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] The opposing roles of the transcription factor E2A and its antagonist Id3 that orchestrate and enforce the naive fate of T cells.2011

    • 著者名/発表者名
      Miyazaki M, Rivera RR, Miyazaki K, Lin YC, Agata Y, Murre C
    • 雑誌名

      Nat Immunol.

      巻: 12 号: 10 ページ: 992-1001

    • DOI

      10.1038/ni.2086

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Regulation of TCR Vγ2 gene rearrangement by the helix-loop-helix protein, E2A.2011

    • 著者名/発表者名
      Nozaki M, Wakae K, Tamaki N, Sakamoto S, Ohnishi K, Uejima T, Minato N, Yanagihara I, Agata Y
    • 雑誌名

      I lit Immunol.

      巻: 23 号: 5 ページ: 297-305

    • DOI

      10.1093/intimm/dxr005

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Regulation of TCR Vγ2 gene rearrangement by the helix-loop-helix protein, E2A2011

    • 著者名/発表者名
      Nozaki M, Wakae K, Tamaki N, Sakamoto S, Ohnishi K, Uejima T, Minato N, Yanagihara I, Agata Y
    • 雑誌名

      Int Immunol

      巻: 23 ページ: 297-305

    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Claudin-4 induction by E-protein activity in later stages of CD4/8 double-positive thymocytes to increase positive selection efficiency2011

    • 著者名/発表者名
      Kawai Y, Hamazaki Y, Fujita H, Fujita A, Sato T, Furuse M, Fujimoto T, Jetten AM, Agata Y, Minato N
    • 雑誌名

      Proc Natl Acad Sci USA

      巻: 108 ページ: 4075-4080

    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] 発生段階特異的なTCRγ遺伝子再構成における転写抑制因子Gfi-1の役割2011

    • 著者名/発表者名
      若江亨祥、坂本修士、山下政克、中山俊憲、湊長博、縣保年
    • 学会等名
      第19回Kyoto T Cell Conference
    • 発表場所
      京都
    • 年月日
      2011-06-11
    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
  • [学会発表] Regulation of Vγ2 gene rearrangement by the helix-loop-helix protein, E2A2010

    • 著者名/発表者名
      Nozaki M, Tamaki N, Sakamoto S, Yanagihara I, Agata Y
    • 学会等名
      14^<th> International Congress of Immunology
    • 発表場所
      神戸市、日本
    • 年月日
      2010-08-26
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] E2A negatively regulates TCR Vγ3 rearrangement viatranscriptional repressor, Gfi-12010

    • 著者名/発表者名
      Wakae K, Sakamoto S, Yamashita M, Nakayama T, Minato N, Agata Y
    • 学会等名
      14^<th> International Congress of Immunology
    • 発表場所
      神戸市、日本
    • 年月日
      2010-08-26
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] bHLH転写因子E2AによるVγ2遺伝子再構成の制御機構2010

    • 著者名/発表者名
      野崎昌俊、柳原格、縣保年
    • 学会等名
      Kyoto T Cell Conference
    • 発表場所
      京都市、日本
    • 年月日
      2010-06-04
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] E2A and CBP/p300 act in synergy to promote chromatin accessibility of the immunoglobulin κ locus in nonlymphoid cells2010

    • 著者名/発表者名
      Agata Y
    • 学会等名
      Gene Expression & Signaling in the Immune System
    • 発表場所
      Cold Spring Harbor, USA
    • 年月日
      2010-04-22
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書

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公開日: 2010-08-23   更新日: 2018-03-28  

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