• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 前のページに戻る

真核細胞におけるRNAサイレンシングの構造基盤の解明

公募研究

研究領域非コードRNA作用マシナリー
研究課題/領域番号 22115504
研究種目

新学術領域研究(研究領域提案型)

配分区分補助金
審査区分 生物系
研究機関東京大学

研究代表者

西増 弘志  東京大学, 理学(系)研究科(研究院), 助教 (00467044)

研究期間 (年度) 2010
研究課題ステータス 完了 (2011年度)
配分額 *注記
8,840千円 (直接経費: 6,800千円、間接経費: 2,040千円)
2011年度: 4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円)
2010年度: 4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円)
キーワードタンパク質 / 核酸 / 結晶構造
研究概要

ショウジョウバエに由来するAUB,AGO3を含むPiwiサブファミリーArgonauteタンパク質のN末端に存在する特定のアルギニン残基が対称的ジメチル化アルギニン(sDMA)修飾され,Tudor(Tud)タンパク質とsDMA依存的に結合することで生殖細胞におけるレトロトランスポゾン抑制に関与する.その分子機構の解明を目指して,ショウジョウバエに由来するTud(11個のTudorドメインを含む)の複数の領域をHisタグ融合タンパク質として大腸菌で発現させ,NiNTAカラムで精製し,sDMAAUB,および.sDMAAGO3ビオチン化ペプチドとストレプトアビジンビーズを用いてプルダウン実験を行った.その結果,特定のTudorドメインを含むいくつかの領域がsDMAAUBやsDMAAGO3ペプチドと結合することがわかった.それらのコンストラクションを大腸菌で大量発現(2.5L)させ,NiNTAカラム,イオン交換カラム,ゲルろ過カラムを用いて高純度に精製した.精製タンパク質を用いてsDMAAUBやsDMAAGO3ペプチドの存在下で結晶化スクリーニングを行い,いくつかのコンストラクションに関して結晶を得ることに成功した.結晶化条件の最適化を行い,X線回折実験が可能な結晶を得た.それらの結晶を用いてSPring-8BL41XUでX線回折実験を行ったが,構造解析には十分な分解能の回折データを得ることはできなかった.そこで結晶性の改良を目指しさらなるコンストラクションや結晶化条件の最適化を行った.

報告書

(1件)
  • 2010 実績報告書
  • 研究成果

    (2件)

すべて 2010

すべて 学会発表 (1件) 図書 (1件)

  • [学会発表] Structural basis of AdoMet-dependent aminocarboxypropyl transfer reaction catalyzed by tRNA-wybutosine synthesizing enzyme, TYW22010

    • 著者名/発表者名
      西増弘志
    • 学会等名
      BMB2010
    • 発表場所
      神戸ポートアイランド
    • 年月日
      2010-12-08
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [図書] 実験医学増刊 拡大・進展を続けるRNA研究の最先端2010

    • 著者名/発表者名
      西増弘志
    • 総ページ数
      207
    • 出版者
      羊土社
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書

URL: 

公開日: 2010-08-23   更新日: 2018-03-28  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi