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小分子アレイシステムを用いた微生物由来P450分子群の機能解析

公募研究

研究領域生合成マシナリー:生物活性物質構造多様性創出システムの解明と制御
研究課題/領域番号 23108505
研究種目

新学術領域研究(研究領域提案型)

配分区分補助金
審査区分 理工系
研究機関東北大学

研究代表者

叶 直樹  東北大学, 大学院・薬学研究科, 准教授 (40317293)

研究期間 (年度) 2011
研究課題ステータス 完了 (2011年度)
配分額 *注記
3,510千円 (直接経費: 2,700千円、間接経費: 810千円)
2011年度: 3,510千円 (直接経費: 2,700千円、間接経費: 810千円)
キーワード小分子マイクロアレイ / シトクロム P450 / 基質特異性解析 / 超音波スプレーノズル / ハイスループットスクリーニング
研究概要

本研究ではcytochrome P450の基質酸化反応の統合的理解を目指している。任意の可溶性P450分子に対する基質と基質特異性解析を迅速化するために、我々はこれまでにNADH固定化基板上に作成した小分子液滴アレイとNAD+選択的検出試薬を用いた基質検出アレイプラットフォームを開発してきた。
本年度はまず、これまでの結果の再現性を確認し、その成果をヨーロッパ化学会誌であるChemBioChem誌上に報告した。一方、本年度の研究計画では、基質特異性が解析されている既知の様々なP450分子とそれらの基質小分子のペアを用いて上記プラットフォームの検証を行う予定であったが、東日本大震災等の事情のため、これまでに4種類のP450分子の発現系と精製系の予備検討準備を行うに留まっている。その代わり、平成24年度に実施する予定であった酵素溶液を液滴アレイ上へ噴霧する方法の予備検討を行った。すなわち、P450cam,putidaredoxin,putidaredoxin reductaseを含む溶液を、超音波スプレーノズルを用いて噴霧し、これらの酵素活性が保持されるかどうかを確認した。その結果、120kHz超音波ノズルを用いた溶液噴霧後も酵素活性は60-70%程度保持されていることが判った。
本課題は平成23年度新規新学術領域研究が採択され、重複制限にかかるため取り消しとなったが、今後、より活性を失わない条件での酵素溶液噴霧を検討し、当初の目的を達成すべく研究を継続する予定である。

報告書

(1件)
  • 2011 実績報告書
  • 研究成果

    (3件)

すべて 2011

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件) 学会発表 (1件) 図書 (1件)

  • [雑誌論文] Detection of cytochrome P450 substrate by using a small-molecule droplet array on an NADH-immobilized solid surface2011

    • 著者名/発表者名
      H.Takayama
    • 雑誌名

      ChemBioChem

      巻: (In press)

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] 化合物アレイ型プラットフォームを用いたcytochrome P450の基質スクリーニング法の開発2011

    • 著者名/発表者名
      叶直樹
    • 学会等名
      第53回天然有機化合物討論会
    • 発表場所
      大阪国際交流センター(招待講演)
    • 年月日
      2011-09-28
    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
  • [図書] Chemical genomics and proteomics : Reviews and protocols2011

    • 著者名/発表者名
      N.Kanoh
    • 出版者
      Humana Press
    • 関連する報告書
      2011 実績報告書

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公開日: 2011-04-06   更新日: 2018-03-28  

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