ＡＬＳサルモデル、患者サンプルを用いたＴＤＰ―４３病態の検索

• 研究領域: シナプス・ニューロサーキットパソロジーの創成
• 研究課題/領域番号: 23110505
• 研究種目: 新学術領域研究(研究領域提案型)
• 配分区分: 補助金
• 審査区分: 生物系
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 横田 隆徳 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (90231688)
• 研究期間 (年度): 2011-04-01 – 2013-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2012年度)
• 配分額: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円); 2012年度: 650千円 (直接経費: 500千円、間接経費: 150千円); 2011年度: 650千円 (直接経費: 500千円、間接経費: 150千円)
• キーワード: ALS / 皮膚 / TDP-43 / RT-PCR

研究実績の概要

本研究では、免疫病理組織学的および定量的RT-PCRを用いた分子生物学的手法により、孤発性ALS患者の生検皮膚におけるTDP-43 mRNA発現量を検索し、孤発性ALSの分子病態におけるTDP-43発現上昇の病態との関連を明らかにし、運動神経選択性の分子基盤を検索することを目的とした。ALS患者および対照疾患患者のヒト生検皮膚で、3.8%チオシアン酸アンモニウムを用いて表皮と真皮を酵素学的に#21085;理し、表皮部分からRNAを抽出した。TDP-43の翻訳領域にprimer/probeを設計し、表皮の内部コントロール分子としてKeratin (KRT) 5, 10を用いた。これらによりTDP-43 mRNAの定量をTaqmanの定量的RT-PCRによって行い、ALS患者12例および対象疾患患者8例の解析を終えた。TDP-43‐KRT10間のCp値の差は疾患対照群：8.02に対しALS群：7.25と低く(P=0.0010)、ALS患者皮膚においてTDP-43のmRNA発現量が1.76倍に増加していることを示していた。TDP-43-KRT5間では疾患対照群：7.68、ALS群：7.85であり、統計学的な有意差を認めなかった(P=0.29)。ALS罹患期間とTDP-43の発現量の関係においては、罹患期間の増加によってTDP-43 #8211; KRT10間のCp値には変化がなく(P=0.61)、加齢によっても変化がないことが示された(P=0.36)。以上よりALS患者の皮膚ではTDP-43のmRNA発現が亢進する病態が存在するが疾患進行によるmRNA発現量には変化がなく、凝集するTDP-43蛋白の増加に対するmRNAによるnegative feedback機構が破綻している可能性があると考えられた。

現在までの達成度 (段落)

24年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

24年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Non-human primate model of amyotrophic lateral sclerosis with cytoplasmic mislocalization of TDP-43 (2012)
  • 著者名/発表者名: Uchida A, Sasaguri H, Enomoto M, (18番目), et al
  • 雑誌名: Brain 巻: 135 号: 3 ページ: 833-46
  • DOI: 10.1093/brain/awr348
  • 査読あり
• [雑誌論文] TDP-43のげっ歯類、霊長類動物を用いた筋萎縮性側索硬化症モデル (2011)
  • 著者名/発表者名: 横田隆徳, 笹栗弘貴
  • 雑誌名: 神経内科 巻: 76(3) ページ: 275-280
• [雑誌論文] ALS-TDPの動物モデル (2011)
  • 著者名/発表者名: 笹栗弘貴, 横田隆徳, 水澤英洋
  • 雑誌名: Clinical Neuroscience別冊 巻: 29 ページ: 1024-1027
• [雑誌論文] HDL facilitates in vivo delivery of a-tocopherol-conj ugated siRNA to the brain (2011)
  • 著者名/発表者名: Uno Y, Piao W, Nishina K, Miyata K, Mizusawa H, Yokota T
  • 雑誌名: Hum Gene Ther 巻: 22 号: 6 ページ: 711-719
  • DOI: 10.1089/hum.2010.083
  • 査読あり
• [雑誌論文] Intraperitoneal AAV9-shRNA inhibits target expression in neonatal skeletal and cardiac muscles (2011)
  • 著者名/発表者名: Mayra A, Tomimitsu H, Kubodera T, Kobayashi M, Piao W, Sunaga F, Hirai Y, Shimada T, Mizusawa H, Yokota T
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 405 号: 2 ページ: 204-209
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2011.01.009
  • 査読あり
• [雑誌論文] In Vivo application of an RNAi strategy for the Selective Suppression of a Mutant Allele (2011)
  • 著者名/発表者名: Kubodera T, Yamada H, Anzai M, Ohira S, Yokota S, Hirai Y, Mochizuki H, Shimada T, Mitani T, Mizusawa H, Yokota T
  • 雑誌名: Hum Gene Ther 巻: 22 号: 1 ページ: 27-34
  • DOI: 10.1089/hum.2010.054
  • 査読あり
• [雑誌論文] Efficient in vivo delivery of siRNA into brain capillary endothelial cells along with endogenous lipoprotein (2011)
  • 著者名/発表者名: Kuwahara H, Nishina K, Yoshida K, Nishina T, Yamamoto M, Saito Y, Piao W, Yoshida M, Mizusawa H, Yokota T
  • 雑誌名: Mol Ther 巻: 19 号: 12 ページ: 2213-2221
  • DOI: 10.1038/mt.2011.186
  • 査読あり
• [雑誌論文] Propagation : prion-like mechanisms can explain spreading of motor neuronal death in amyotrophic lateral sclerosis? (2011)
  • 著者名/発表者名: Kuwabara S, Yokota T
  • 雑誌名: J Neurol Neurosurg Psychiatry 巻: 82 号: 11 ページ: 1181-1182
  • DOI: 10.1136/jnnp-2011-300691
  • 査読あり
• [学会発表] 細胞内異常局在を呈した野生型TDP-43過剰発現によるALS霊長類モデルNon-human primate model of ALS with cytoplasmic mislocalization of wild-type TDP-43 (2011)
  • 著者名/発表者名: 大久保卓哉, 内田あずさ, 笹栗弘貴, 木村展之, 田尻美緒, 久保寺隆行, 内原俊記, 水澤英洋, 横田隆徳
  • 学会等名: 第34回日本神経科学大会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011-09-17
• [学会発表] TDP-43の断片化とリン酸化はALS霊長類モデルの運動ニューロン変性に必要ではないThe truncation and phosphorylation of TDP-43 is not prerequisite for motoneuronal degeneration in non-human primate model of amyotrophic lateral sclerosis (2011)
  • 著者名/発表者名: 田尻美緒, 坂上史佳, 大久保卓哉, 内田あずさ, 笹栗弘貴, 木村展之, 水澤英洋, 横田隆徳
  • 学会等名: 第34回日本神経科学大会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011-09-16
• [学会発表] TDP-43強制発現動物モデルにおける病理・電気生理 (2011)
  • 著者名/発表者名: 横田隆徳
  • 学会等名: 第52回日本神経学会学術大会
  • 発表場所: 愛知
  • 年月日: 2011-05-20
• [学会発表] TDP-43過剰発現による孤発性ALSモデルの作製 (2011)
  • 著者名/発表者名: 横田隆徳, 内田あずさ, 笹栗弘貴, 田尻美緒, 佐野達彦, 内原俊記, 大久保卓哉, 水澤英洋
  • 学会等名: 第52回日本神経学会学術大会
  • 発表場所: 愛知
  • 年月日: 2011-05-19
• [学会発表] 上肢完全麻痺を示した孤発性筋委縮性側索硬化症における脊髄前角細胞でのTDP-43の細胞内局在 (2011)
  • 著者名/発表者名: 佐野達彦, 上野智美, 内田あずさ, 内原俊記, 大久保卓哉, 水澤英洋, 横田隆徳
  • 学会等名: 第52回日本神経学会学術大会
  • 発表場所: 愛知
  • 年月日: 2011-05-18
• [学会発表] 孤発性筋委縮性側索硬化症のラットモデル作製 (2011)
  • 著者名/発表者名: 大久保卓哉, 田尻美緒, 内田あずさ, 須永史子, 平井高志, 澁谷和幹, 金井数明, 桑原聡, 水澤英洋, 横田隆徳
  • 学会等名: 第52回日本神経学会学術大会
  • 発表場所: 愛知
  • 年月日: 2011-05-18
• [学会発表] Non-human primate model of ALS with cytoplasmic mislocalization of wild-typeTDP-43 (2011)
  • 著者名/発表者名: Yokota T
  • 学会等名: The 63^<rd> AAN Annual Meeting
  • 発表場所: Honolulu, Hawaii
  • 年月日: 2011-04-14
• [学会発表] Non-human primate model of ALS with cytoplasmic mislocalization of wild-type TDP-43 (2011)
  • 著者名/発表者名: Ohkubo T, Uchida A, Sasaguri H, Kimura N, Tajiri M, Kubodera T, Uchihara T, Mizusawa H, Yokota T
  • 学会等名: The 34^<th> Annual Meeting of Japan Neuroscience Society
  • 発表場所: Yokohama, Japan
• [学会発表] The truncation and phosphorylation of TDP-43 is not prerequisite for motoneuronal degeneration in non-human primate model of amyotrophic lateral sclerosis (2011)
  • 著者名/発表者名: Tajiri M, Sakaue F, Ohkubo T, Uchida A, Sasaguri H, Kimura N, Mizusawa H, Yokota T
  • 学会等名: The 34^<th> Annual Meeting of Japan Neuroscience Society
  • 発表場所: Yokohama, Japan
• [備考]
  • URL: http://www.tmd.ac.jp/press-release/20120118/index.html