公募研究
新学術領域研究(研究領域提案型)
本年度は懸案であった再構成型翻訳システムを完成させた。ＨｅＬａ細胞よりリボソーム、ｔＲＮＡ，ｅＥＦ２を精製した。ｅＥＦ１（ｅＥＦ１Ａ， ｅＥＦ１Ｂａｌｆａ， ｅＥＦ１Ｂｇａｍｍａ）複合体とｅＲＦ（ｅＲＦ１， ｅＲＦ３）複合体はそれぞれＢＨＫ２１細胞で発現し、ニッケルカラムで精製した。２０種類のアミノアシルｔＲＮＡ合成酵素もＢＨＫ２１細胞で発現させた。そのうちＧｌｕ－ＰｒｏＲＳ， ＬｙｓＲＳ， ＡｒｇＲＳ， ＧｌｎＲＳ， ＭｅｔＲＳ， ＬｅｕＲＳ， ＩＬｅＲＳ、ＡｓｐＲＳは複合体として精製した。以上の因子とＴ７ＲＮＡポリメラーゼ、ＡＴＰ，ＧＴＰ，ＣＴＰ，ＵＴＰ，アミノ酸などと混合し，システムを構築した。テンプレートはＣ型肝炎ウイルスのリボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）の下流に目的タンパク質をコードするようにした。レニラルシフェラーゼ（３８ｋＤａ），Ａｇｏ－２（８０ｋＤａ）そしてｂｅｔａ－Ｇａｌ （１２０ｋＤａ）をコードさせるとそれぞれ全長のタンパク質が合成された。このシステムを用い、脳心筋炎ウイルスのカプシド分断のメカニズムを探った。カプシドタンパクである２Ａ－２Ｂの部分はウイルス由来のプロテアーゼによって切断されず、分断のメカニズムは不明であった。ヒト細胞抽出液由来タンパク質合成系で２Ａ２Ｂ部分を翻訳すると２Ａと２Ｂに分断された。そのメカニズムを探るために２Ａ２Ｂ部分を上の再構成型翻訳システムで反応させた。すると、抽出液由来タンパク質合成系と同様に２Ａと２Ｂに分断されて合成された。このことは２Ａ２Ｂの分断には特別な因子は必要でないということを示している。そして、ｅＲＦを抜いて翻訳すると、２Ａは合成されたが２Ｂは合成されなかった。２Ａ２Ｂ部位には翻訳終結コドンは無いが、終結因子が２Ａ２Ｂの分断に必要であることがわかった。
24年度が最終年度であるため、記入しない。
すべて 2013 2012 2011
すべて 雑誌論文 (6件) (うち査読あり 6件) 学会発表 (20件) (うち招待講演 2件) 図書 (2件)
Protein Expression and Purification
巻: 87 号: 1 ページ: 5-10
10.1016/j.pep.2012.10.001
巻: 82 号: 1 ページ: 61-69
10.1016/j.pep.2011.11.010
Biotechnology Letters
巻: 34 号: 1 ページ: 67-73
10.1007/s10529-011-0744-z
巻: 34 号: 3 ページ: 67-73
10.1007/s10529-012-1086-1
J Biochemistry
巻: 152 号: 4 ページ: 293-295
10.1093/jb/mvs091
10031166141
J.Biochemistry
巻: 150 号: 4 ページ: 423-430
10.1093/jb/mvr072
