| 配分額 *注記 |
11,960千円 (直接経費: 9,200千円、間接経費: 2,760千円)
2012年度: 5,980千円 (直接経費: 4,600千円、間接経費: 1,380千円)
2011年度: 5,980千円 (直接経費: 4,600千円、間接経費: 1,380千円)
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| 研究実績の概要 |
HPV16 E6,E7, c-MYC, 活性型RASの４因子をヒト正常子宮頸部角化細胞(HCK)に導入すると高率にiCSCが出現しがん原性を獲得することを観察していた。次いでtetOff制御系にてこれら4因子を発現誘導するHCK細胞を樹立した。この細胞をヌードマウス皮下に移植するとドキシサイクリン(DOX)非投与群でのみ1-2ヶ月で腫瘍を形成した。腫瘍形成後にDOXを投与すると腫瘍は急速に退縮した。形成された腫瘍は扁平上皮がん組織像を示し、退縮後の遺残組織からは角化を伴う重層扁平上皮組織像が認められた。腫瘍が退縮したマウスからDOXを除去すると、再度腫瘍を形成した。組織学的には、CIN様の構築を示す領域と浸潤性扁平上皮がんを示す領域が認められた。その後、活性型RASの活性を4-OHTにて制御できるよう変異ER-LBDとの融合遺伝子に置き換えたレンチウイルスベクターやMYC遺伝子発現を可視化できるようGFPとの融合遺伝子に置き換えたレンチウイルスベクターを構築した。さらにMYCに薬剤により制御可能なデグロンを融合したレンチウイルスベクターも作製し、HPV16 E6,E7, c-MYC, 活性型RASの発現または活性を独立に制御することによりin vitroの多段階発がんモデルを完成させる準備を完了した。一方、de novo子宮頸がん発がんモデルの作出の計画はEcotropic MLVのEnvによりパッケージングしたレンチウイルスの調製を進め、ヌードマウス皮内にtetOffレンチウイルスとHPV16 E6,E7, c-MYC, 活性型RASの４因子をTRE制御下に発現するレンチウイルスを共接種したが腫瘍形成には至っていない。ウイルス感染効率の評価と共に、単一レンチウイルスベクターによるテトラサイクリン誘導系(tetOff)レンチウイルスベクターを開発し接種実験の準備を完了した。
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